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环介导等温扩增技术检测转基因油菜RT73

中文摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-12页
第1章 绪论第12-27页
   ·转基因植物的概述第12-16页
     ·转基因植物的发展概况第12-13页
     ·转基因植物的安全性评价第13-14页
     ·转基因植物生物安全管理第14-16页
   ·转基因植物检测技术的研究和应用现状第16-20页
     ·聚合酶链式反应定性检测第16-18页
       ·聚合酶链式反应检测技术第16-17页
       ·多重聚合酶链式反应检测技术第17页
       ·巢式和半巢式聚合酶链式反应检测技术第17页
       ·电化学发光 PCR 技术第17页
       ·热不对称交结 PCR(TAIL-PCR)第17-18页
     ·聚合酶链式反应定量检测第18-19页
       ·PCR-ELISA第18页
       ·竞争性定量 PCR第18页
       ·实时荧光定量 PCR第18-19页
     ·酶联免疫吸附法检测第19页
     ·基因芯片检测第19-20页
   ·环介导等温扩增技术第20-26页
     ·环介导等温扩增技术概况第20-21页
     ·LAMP 的反应原理和特点第21-23页
     ·LAMP 扩增产物的检测方法第23-24页
       ·肉眼观察法第23页
       ·染料法第23-24页
       ·实时浊度法第24页
     ·环介导等温扩增技术的应用第24-26页
       ·LAMP 在检测病毒中的应用第24-25页
       ·LAMP 在寄生虫检测中的应用第25页
       ·LAMP 在细菌检测中的应用第25-26页
       ·LAMP 在转基因检测中的应用第26页
   ·研究内容和创新之处第26-27页
第2章 材料与方法第27-38页
   ·材料与试剂第27-28页
     ·实验材料与设备第27页
     ·主要试剂第27-28页
     ·主要实验材料第28页
   ·LAMP 方法检测油菜 RT73 品系第28-34页
     ·油菜基因组的提取第28页
     ·LAMP 引物的设计和处理第28-31页
     ·模板 DNA 质量检测第31页
     ·LAMP 反应体系的建立与引物的初筛第31页
     ·LAMP 反应体系的优化第31-32页
       ·不同 dNTP 浓度对 LAMP 扩增效率的影响第32页
       ·不同 Mg2+浓度对 LAMP 扩增效率的影响第32页
       ·不同 Bst DNA 聚合酶浓度对 LAMP 扩增效率的影响第32页
       ·不同反应温度对 LAMP 扩增效率的影响第32页
       ·加甜菜碱与否对 LAMP 扩增效率的影响第32页
     ·LAMP 引物特异性实验第32-33页
     ·LAMP 引物灵敏度实验第33-34页
     ·LAMP 引物稳定性实验第34页
   ·实时荧光 PCR 方法检测油菜 RT73 品系第34-36页
     ·油菜基因组的提取第34页
     ·实时荧光 PCR 引物和探针的设计和处理第34页
     ·实时荧光 PCR 标准体系的建立第34-35页
     ·实时荧光 PCR 引物特异性第35页
     ·实时荧光 PCR 引物灵敏度第35页
     ·实时荧光 PCR 体系的重复性第35-36页
   ·LAMP 检测方法的室内验证第36-38页
     ·模拟样品的配制第36页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 方法稳定性的对比验证第36页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 方法灵敏度的对比验证第36页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 方法特异性的对比验证第36-38页
第3章 实验结果第38-68页
   ·油菜基因组 DNA 的质量检测第38-39页
   ·引物的初筛选第39-40页
   ·LAMP 反应条件的优化第40-48页
     ·不同 dNTP 浓度对 LAMP 扩增效率的影响第40-41页
     ·不同 Mg2+浓度对 LAMP 扩增效率的影响第41-42页
     ·不同 Bst DNA 聚合酶浓度对 LAMP 扩增效率的影响第42-44页
     ·不同反应温度对 LAMP 扩增效率的影响第44-46页
     ·加甜菜碱与否对 LAMP 扩增效率的影响第46-48页
   ·LAMP 引物特异性实验第48-49页
   ·LAMP 引物灵敏度实验第49-50页
   ·LAMP 引物稳定性实验第50-52页
   ·实时荧光 PCR 体系的特异性第52-53页
   ·实时荧光 PCR 体系的灵敏度第53页
   ·实时荧光 PCR 体系的重复性第53-54页
   ·LAMP 方法的室内验证第54-68页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 稳定性对比分析第54-61页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 灵敏度对比分析第61-62页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 检测时间对比分析第62页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 结果判读方法的对比分析第62页
     ·LAMP 方法和实时荧光 PCR 方法特异性对比分析第62-68页
第4章 讨论第68-78页
   ·油菜基因组 DNA 的提取及质量检测第68页
   ·靶基因的选择第68-69页
     ·转基因油菜 RT73 内源基因序列的选择第69页
     ·转基因油菜 RT73 外源基因序列的选择第69页
   ·LAMP 检测中引物的设计第69-70页
   ·LAMP 反应体系建立的各个影响因素第70-72页
     ·Bst DNA 聚合酶第70-71页
     ·Mg2+浓度和 dNTP 浓度第71页
     ·甜菜碱第71-72页
     ·反应温度第72页
     ·反应时间第72页
   ·LAMP 反应体系的特异性第72-73页
   ·室内验证第73-74页
   ·实时荧光 PCR 的优点和不足第74-75页
   ·LAMP 技术的方法学评价第75-76页
   ·污染因素及防治措施第76-78页
第5章 结论第78-79页
参考文献第79-89页
作者简介及在学期间取得的科研成果第89-90页
致谢第90页

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