| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-25页 |
| ·蛋白质的N-糖基化过程及相关的酶 | 第10-16页 |
| ·蛋白质N-聚糖在内质网中的加工过程及参与的酶 | 第10-12页 |
| ·蛋白质N-聚糖在高尔基体中的加工过程及参与的酶 | 第12-14页 |
| ·N-聚糖在哺乳动物细胞和昆虫细胞加工的不同之处 | 第14-16页 |
| ·β-N-乙酰己糖胺酶 | 第16-22页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶的生理功能 | 第17-20页 |
| ·昆虫中20家族β-N-乙酰己糖胺酶 | 第20-21页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶FDL | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第22-23页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中高效表达的因素 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母表达系统的缺陷 | 第23页 |
| ·本论文的选题依据和研究内容 | 第23-25页 |
| ·选题依据 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| 2 亚洲玉米螟β-N-乙酰己糖胺酶FDL基因的钓取及表达模式 | 第25-36页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料与方法 | 第25-29页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的获得 | 第25-26页 |
| ·3’RACE实验引物的设计和合成 | 第26-27页 |
| ·3’RACE获取3’端序列 | 第27页 |
| ·5’RACE获取5’端序列 | 第27-28页 |
| ·OfFDL基因的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| ·OfFDL基因表达模式分析 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-34页 |
| ·OfFDL基因序列获取及生物信息学分析 | 第29-33页 |
| ·OfFDL基因转录水平 | 第33-34页 |
| ·分析讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 3 β-N-乙酰己糖胺酶OfFDL的重组表达、分离纯化与性质表征 | 第36-60页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·实验材料与方法 | 第36-42页 |
| ·表达载体pPIC9-OfFDL的构建 | 第36-37页 |
| ·酵母表达载体转化毕赤酵母GS115 | 第37-38页 |
| ·阳性酵母菌株的诱导表达 | 第38页 |
| ·重组OfFDL的分离纯化 | 第38-39页 |
| ·重组OfFDL糖基化分析 | 第39页 |
| ·重组OfFDL的酶活力测定 | 第39-40页 |
| ·重组OfFDL的酶学性质研究—最适pH | 第40-41页 |
| ·重组OfFDL的酶学性质研究—最适温度 | 第41页 |
| ·重组OfFDL的酶学性质研究—动力学参数测定 | 第41页 |
| ·重组OfFDL的底物特异性 | 第41页 |
| ·重组OfFDL的抑制活性测定 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-56页 |
| ·表达载体pPIC9-OfFDL的构建与酵母转化 | 第42-43页 |
| ·重组OfFDL在毕赤酵母中的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·重组OfFDL的分离纯化及糖基化分析 | 第44-46页 |
| ·重组OfFDL的最适催化条件 | 第46-49页 |
| ·重组蛋白OfFDL动力学参数测定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白OfFDL底物抑制 | 第50页 |
| ·重组蛋白OfFDL的底物选择性 | 第50-53页 |
| ·重组蛋白OfFDL的抑制剂 | 第53-56页 |
| ·分析讨论 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录A OfFDL编码区的cDNA序列与其编码的氨基酸序列 | 第69-73页 |
| 附录B OfFDL编码的氨基酸序列的多重序列比对 | 第73-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
