| 目录 | 第1-7页 |
| 本文的创新性研究工作 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第11-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 结核分枝杆菌与结核病研究历史及我国结核病发展现状 | 第11-12页 |
| 2 结核分枝杆菌与宿主相互作用机制 | 第12-18页 |
| ·感染结核分枝杆菌的宿主应答机制 | 第12-16页 |
| ·先天免疫 | 第13-16页 |
| ·成熟吞噬小体的形成及其直接杀菌作用 | 第13-14页 |
| ·巨噬细胞凋亡 | 第14页 |
| ·依赖自由基的抗菌机制：活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)和活性氮(Reactive NitrogenIntermediates,RNI) | 第14-16页 |
| ·T细胞免疫及细胞因子 | 第16页 |
| ·结核分枝杆菌在宿主环境中的存活机制 | 第16-18页 |
| 3 结核分枝杆菌的模式菌株——耻垢分枝杆菌 | 第18页 |
| 4 检测基因表达谱分析常用实验方法 | 第18-20页 |
| 5 选题目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 实验研究 | 第21-53页 |
| 第二章 耐H_2O_2耻垢分枝杆菌突变株筛选及表型鉴定 | 第21-32页 |
| 1 实验材料 | 第21-24页 |
| ·实验菌株 | 第21页 |
| ·试剂耗材 | 第21-22页 |
| ·耻垢分枝杆菌培养基及MIC测定所需试剂耗材 | 第21页 |
| ·菌体总蛋白提取、蛋白浓度测定及过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定所需试剂耗材 | 第21-22页 |
| ·相关溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·培养基的配制 | 第22页 |
| ·蛋白提取及过氧化氢酶过氧化物酶活性测定相关溶液配制 | 第22-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-29页 |
| ·耻垢分枝杆菌的培养 | 第24页 |
| ·H_2O_2对mc2~155的最小抑菌浓度(MIC)测定 | 第24-25页 |
| ·耐H_2O_2耻垢分枝杆菌突变株筛选 | 第25页 |
| ·mc~2155与突变株对H_2O_2反应的表型鉴定 | 第25-26页 |
| ·突变株对H_2O_2的MIC测定 | 第25页 |
| ·mc~2155与突变株对巨噬细胞生理浓度H_2O_2处理的反应 | 第25-26页 |
| ·mc~2155与突变株的过氧化氢酶和过氧化物酶活性测定 | 第26-29页 |
| ·总蛋白提取 | 第27页 |
| ·蛋白含量测定 | 第27页 |
| ·过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定 | 第27-29页 |
| ·野生型与突变株总蛋白蛋白SDS-PAGE | 第29页 |
| 3 实验结果 | 第29-32页 |
| ·H_2O_2对mc~2155的最小抑菌浓度 | 第29页 |
| ·初始H_2O_2处理的浓度设置及每次提高H_2O_2浓度梯度 | 第29-30页 |
| ·H_2O_2对筛选出的突变株的最小抑菌浓度 | 第30页 |
| ·mc~2155与mc~251对不同浓度H_2O_2处理的反应 | 第30-31页 |
| ·mc~2155与mc~251过氧化氢酶、过氧化物酶活性 | 第31-32页 |
| 第三章 MC~2155、MC~251对数生长前期RNA提取 | 第32-43页 |
| 1 材料 | 第32-34页 |
| ·试剂及耗材 | 第32-33页 |
| ·溶液配制 | 第33-34页 |
| ·RNA提取相关溶液配制 | 第33页 |
| ·RNA电泳及DNA电泳相关溶液配制 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-39页 |
| ·提RNA所需细菌培养及收集 | 第34页 |
| ·RNA粗提 | 第34-35页 |
| ·粗提RNA浓度及质量检测 | 第35-36页 |
| ·NanoDrop 2000检测RNA浓度及质量 | 第35页 |
| ·尿素聚丙烯酰胺凝胶(Urea-PAGE)电泳鉴定RNA完整性 | 第35-36页 |
| ·Dnase Ⅰ消化RNA样品中的DNA | 第36-38页 |
| ·RNA中DNA消化体系 | 第36页 |
| ·纯化去DNA产物抽提 | 第36-37页 |
| ·纯化后RNA质量检测 | 第37页 |
| ·常规PCR检测总RNA中的DNA是否消化完全 | 第37-38页 |
| ·纯化后的样品再次检测 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-43页 |
| ·粗提RNA及纯化后RNA质量检测结果 | 第39-40页 |
| ·以纯化后RNA样品作模板常规PCR结果 | 第40-41页 |
| ·RNA样品的检测报告 | 第41-43页 |
| 第四章 RNA-SEQ基本流程及信息分析 | 第43-51页 |
| 1 试剂与仪器 | 第43页 |
| 2 实验流程 | 第43页 |
| 3 RNA测序信息分析 | 第43-45页 |
| ·原始序列数据与去除杂质数据获得 | 第43-44页 |
| ·测序评估 | 第44页 |
| ·差异表达基因分析及基因表达注释 | 第44-45页 |
| ·GO功能显著性富集分析 | 第44-45页 |
| ·KEGG Pathway显著性富集分析 | 第45页 |
| 4 实验结果 | 第45-51页 |
| ·测序评估的基本定量参数 | 第45-46页 |
| ·高级分析 | 第46-51页 |
| ·差异表达基因分析 | 第46-47页 |
| ·GO功能显著性富集分析 | 第47-50页 |
| ·KEGG Pathway显著性富集分析 | 第50-51页 |
| 第五章 讨论分析 | 第51-53页 |
| 第三部分 结论 | 第53-54页 |
| 第四部分 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
