| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词和术语表 | 第8-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 达托霉素概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 达托霉素的结构和抗菌机制 | 第12-14页 |
| 1.1.2 达托霉素的生物合成 | 第14-17页 |
| 1.2 环脂肽类抗生素合成的起始反应 | 第17-21页 |
| 1.3 犬尿氨酸途径 | 第21-22页 |
| 1.4 达托霉素的结构改造与提高产量的策略 | 第22-24页 |
| 1.5 本文研究的内容和意义 | 第24-26页 |
| 1.5.1 本文的立项依据 | 第24页 |
| 1.5.2 本文研究的内容 | 第24-25页 |
| 1.5.3 本文研究的意义 | 第25-26页 |
| 第2章 达托霉素合成起始反应的优化 | 第26-44页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-31页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.2 引物 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要仪器及设备 | 第28-29页 |
| 2.2.4 培养基及培养条件 | 第29页 |
| 2.2.5 常用试剂 | 第29-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.3.1 PCR反应体系与程序 | 第31-32页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.3.3 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.3.4 玫瑰孢链霉菌基因组DNA的抽提 | 第32-33页 |
| 2.3.5 DptE、DptF及融合蛋白DptEF的表达纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.6 DptE、DptF及融合蛋白DptEF的体外反应 | 第34页 |
| 2.3.7 DptE、DptF及融合蛋白DptEF的酶促动力学参数测定 | 第34-35页 |
| 2.3.8 HPLC检测AMP的浓度 | 第35页 |
| 2.3.9 dptE和dptF的原位融合质粒的构建 | 第35页 |
| 2.3.10 链霉菌的结合转导 | 第35-36页 |
| 2.3.11 dptE和dptF的原位融合菌株的构建 | 第36页 |
| 2.3.12 瑰孢链霉菌的摇瓶发酵 | 第36-37页 |
| 2.3.13 HPLC检测达托霉素的产量 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-43页 |
| 2.4.1 DptE和DptF的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 2.4.2 体外表征DptE和DptF融合后催化活性的改变 | 第39-41页 |
| 2.4.3 DptE和DptF融合后对达托霉素产量的影响 | 第41-42页 |
| 2.4.4 DptE和DptF融合后对自身转录水平的影响 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第3章 犬尿氨酸前体途径的优化 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-48页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第44-46页 |
| 3.2.2 引物 | 第46-47页 |
| 3.2.4 培养基及培养条件 | 第47页 |
| 3.2.5 常用试剂 | 第47-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.3.1 △sro3365、△sro3366、△sro3367和△dptJ敲除质粒的构建 | 第48页 |
| 3.3.2 dptJ、sro3367、sro3365高表达质粒的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.3 dptJ和sro3367的转录分析 | 第49页 |
| 3.3.4 玫瑰孢链霉菌的发酵罐发酵 | 第49页 |
| 3.3.5 本章所用其它方法 | 第49-50页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第50-54页 |
| 3.4.1 犬尿氨酸途径相关基因的生物信息学分析 | 第50页 |
| 3.4.2 犬尿氨酸途径中甲酰胺酶的寻找 | 第50-51页 |
| 3.4.3 TDO编码基因sro3367和dptJ的功能分析 | 第51-52页 |
| 3.4.4 犬尿氨酸途径优化 | 第52-53页 |
| 3.4.5 犬尿氨酸途径优化和起始反应优化的整合 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第4章 结论与展望 | 第56-57页 |
| 4.1 本文研究成果 | 第56页 |
| 4.2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
