| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| ·研究背景 | 第10页 |
| ·多不饱和脂肪酸的合成及研究进展 | 第10-13页 |
| ·多不饱和脂肪酸的合成 | 第10-13页 |
| ·多不饱和脂肪酸的研究进展 | 第13页 |
| ·ω-6 PUFAs生物学功能及脱氢酶的研究进展 | 第13-16页 |
| ·ω-6多不饱和脂肪酸生物学功能 | 第13-15页 |
| ·ω-6PUFAs脱氢酶(△-12脂肪酸脱氢酶)研究进展 | 第15-16页 |
| ·Fat-2基因的研究进展 | 第16-17页 |
| ·动物转基因及安全评价 | 第17-20页 |
| ·动物转基因的基本原理 | 第18页 |
| ·转基因动物构建的基本方法 | 第18-20页 |
| ·研究目的及意义 | 第20页 |
| 2. 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·试验材料 | 第20-23页 |
| ·试验组织样材料 | 第20页 |
| ·试验试剂 | 第20-21页 |
| ·试验仪器 | 第21页 |
| ·主要溶液的配制 | 第21-23页 |
| ·主要生物信息数据库和计算机软件 | 第23页 |
| ·fat-2基因的克隆 | 第23-26页 |
| ·C.elegans总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第24页 |
| ·PCR引物的设计 | 第24页 |
| ·目的基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的回收 | 第25-26页 |
| ·目的基因的连接及转化 | 第26页 |
| ·连接 | 第26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·目的基因序列测定 | 第27页 |
| ·C.elegans fat-2基因真核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·表达引物的设计 | 第28-31页 |
| ·表达基因的亚克隆 | 第28页 |
| ·C.elegans fat-2基因重组T克隆质粒的构建 | 第28页 |
| ·C.elegans fat-2基因重组T克隆质粒的提取与酶切 | 第28-30页 |
| ·PEGFP-N1质粒的提取与酶切 | 第30页 |
| ·酶切回收的C.elegans faf-2质粒与PEGFP-N1质粒的连接与转化 | 第30-31页 |
| ·重组表达质粒双酶切鉴定 | 第31页 |
| ·重组表达质粒测序鉴定 | 第31页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第31页 |
| ·健康牛耳成纤维细胞的获得与Fat-2基因的转染 | 第31-32页 |
| ·原代细胞的培养 | 第31-32页 |
| ·转染 | 第32页 |
| ·阳性细胞株的筛选及分析 | 第32-33页 |
| ·阳性细胞株的筛选 | 第32页 |
| ·阳性细胞株的RNA与蛋白质的分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-44页 |
| ·C.elegans fat-2基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·Fat-2基因的蛋白质生物信息学分析 | 第34-38页 |
| ·氨基酸翻译和蛋白质组分分析 | 第34-35页 |
| ·脂肪酸去饱和酶的信号肽位点预测 | 第35-36页 |
| ·蛋白质跨膜区预测 | 第36-37页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第37-38页 |
| ·亚克隆添加酶切位点 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第39-41页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒的表达情况检测 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pEGFP-N1-fat-2的转染结果 | 第41页 |
| ·单克隆筛选结果 | 第41-42页 |
| ·阳性细胞挑选结果 | 第42-44页 |
| ·RNA分析 | 第43页 |
| ·Western Blotting分析 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-48页 |
| ·fat-2基因克隆及载体构建 | 第44-45页 |
| ·阳性细胞株的建立 | 第45-46页 |
| ·转基因动物安全性讨论 | 第46-47页 |
| ·试验过程中遇到的问题及解决方法 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
