| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语词表 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| ·猪瘟病毒 | 第12-23页 |
| ·猪瘟流行病学 | 第12-14页 |
| ·CSFV基因组结构及功能 | 第14-19页 |
| ·CSFV的实验室诊断 | 第19-20页 |
| ·CSFV的防制 | 第20-22页 |
| ·猪瘟感染性克隆研究进展 | 第22页 |
| ·猪瘟感染过程中Npro调控Ⅰ型干扰素的研究 | 第22-23页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻病毒的研究 | 第23-24页 |
| ·目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-46页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第25-26页 |
| ·毒株、菌种和载体 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-46页 |
| ·溶液试剂的配制 | 第26-28页 |
| ·细胞及病毒培养相关的实验方法 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增用引物设计 | 第30-32页 |
| ·病毒总RNA的制备 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR及PCR扩增与检测 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第34页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第34-38页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第38页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·组织总RNA的反转录 | 第39页 |
| ·组织总cDNA的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·原核表达 | 第40-44页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44页 |
| ·Western-Blot操作方法 | 第44-45页 |
| ·免疫细胞化学 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-70页 |
| ·猪瘟疫苗株全长cDNA的克隆及载体构建 | 第46-54页 |
| ·分段扩增连接 | 第46页 |
| ·构建的猪瘟疫苗株全长cDNA测序分析 | 第46-47页 |
| ·回复突变及突变结果分析 | 第47-54页 |
| ·含有EGFP的猪瘟标记病毒的构建 | 第54-58页 |
| ·pSK-TfiI(-)载体的构建 | 第54页 |
| ·EGFP基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·pSK-TfiI(-)-Npro质粒的构建 | 第55页 |
| ·pSK-TfiI(-)-Npro-EGFP质粒的构建 | 第55-56页 |
| ·pSK-cDNA-5'EGFP质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·pOK-cDNA-EGFP(pOKCE)质粒的构建 | 第57-58页 |
| ·CSFV-BVDV E2全长cDNA的构建 | 第58-62页 |
| ·BVDV E2基因的扩增 | 第58-59页 |
| ·BVDV E2基因的突变 | 第59-60页 |
| ·pSK-TfiI(-)-Npro-BVDV E2m的构建及鉴定 | 第60-61页 |
| ·pSK-CSFV5'-BE2m的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| ·poK-CSFV-BVDV E2m(pOKCBE) | 第62页 |
| ·三个感染性克隆株的恢复 | 第62-63页 |
| ·猪瘟感染过程中Npro调控Ⅰ型干扰素相关基因的克隆研究 | 第63-70页 |
| ·IRF3和IRF7基因的扩增 | 第63页 |
| ·IRF3/7真核载体的构建 | 第63-65页 |
| ·IRF3/7原核载体的构建 | 第65-66页 |
| ·IRF3/7原核表达 | 第66-67页 |
| ·免疫细胞化学检测病毒感染后IRF3/IRF7分布情况 | 第67-68页 |
| ·IRF3/7 WeStern-Blot | 第68页 |
| ·Npro原核表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·人TRIM21及猪Trim21相关质粒的构建 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-74页 |
| ·猪瘟全长cDNA的构建 | 第70-71页 |
| ·猪瘟感染性克隆的恢复 | 第71-72页 |
| ·猪瘟感染性克隆获救的影响因素 | 第72页 |
| ·关于猪瘟病毒感染的分子机制的探讨 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
