| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-23页 |
| ·布鲁氏菌病概述 | 第10页 |
| ·布鲁氏菌的分类 | 第10-11页 |
| ·布鲁氏菌的生物学特性 | 第11-12页 |
| ·形态及染色特性 | 第11页 |
| ·布鲁氏菌的生化特性 | 第11-12页 |
| ·布鲁氏菌病的发病机理 | 第12页 |
| ·布鲁氏菌病的诊断 | 第12-15页 |
| ·凝集试验 | 第12-13页 |
| ·补体结合试验（CFT） | 第13页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第13-14页 |
| ·胶体金免疫层析技术（GICA） | 第14-15页 |
| ·分子生物学诊断技术-PCR 及其衍生技术 | 第15页 |
| ·布鲁氏菌表面抗原 | 第15-18页 |
| ·布鲁氏菌的外膜蛋白研究进展 | 第16-17页 |
| ·脂多糖 | 第17-18页 |
| ·布鲁氏菌的基因组学研究 | 第18页 |
| ·布鲁氏菌毒力因子研究进展 | 第18-21页 |
| ·BvrR/BvrS 双组分系统 | 第18-19页 |
| ·Ⅳ型分泌系统 | 第19-20页 |
| ·应激反应蛋白 | 第20-21页 |
| ·密度感应系统 | 第21页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂和仪器 | 第23-24页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| ·试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·布鲁氏菌 DNA 模板的提取 | 第26页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·SP41 基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第27页 |
| ·感受肽细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·克隆载体 pEASY-T3 与 SP41 的连接 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选（蓝白斑筛选） | 第28页 |
| ·质粒抽提 | 第28-29页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·测序及序列的同源性分析 | 第29页 |
| ·pET-32a(+)原核表达载体与目的片段的连接 | 第29-30页 |
| ·pET-32a(+)-SP41 重组质粒的诱导表达 | 第30页 |
| ·pET-32a(+)-SP41 融合蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第30-32页 |
| ·pET-32a(+)-SP41 诱导条件的优化 | 第32页 |
| ·pET-32a(+)-SP41 重组蛋白的亲和纯化 | 第32-33页 |
| ·Bradford 方法测定纯化蛋白的浓度 | 第33页 |
| ·重组蛋白的 Western-blot 分析 | 第33-35页 |
| ·pET-32a(+)-SP41 融合蛋白抗血清的制备 | 第35页 |
| ·抗血清效价测定 | 第35-36页 |
| ·间接 ELISA 方法的建立 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-45页 |
| ·SP41(1-1302)基因片段的扩增 | 第37页 |
| ·重组克隆质粒的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·序列同源性比较 | 第38-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40页 |
| ·SP41 在大肠杆菌中的诱导表达及条件优化 | 第40-42页 |
| ·蛋白的可溶性分析 | 第42页 |
| ·SP41 基因原核表达产物的纯化 | 第42-43页 |
| ·纯化目的蛋白的浓度测定 | 第43页 |
| ·重组蛋白的 Western-blot 分析 | 第43页 |
| ·iELISA 方法检测抗血清效价 | 第43-44页 |
| ·间接 ELISA 检测病牛血清的方法建立 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·基因的选择 | 第45页 |
| ·重组质粒的诱导表达及条件优化 | 第45-46页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
