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种植年限对牡丹根际土壤微生物群落结构的影响

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-13页
1 前言第13-40页
   ·牡丹根腐病的发生现状第13页
   ·牡丹根腐病的病原菌—茄病镰刀菌的生物学特征第13-14页
   ·发病原因及规律第14页
   ·牡丹根腐病病害症状第14-15页
   ·牡丹根腐病的防治第15-27页
     ·农业防治第15页
     ·化学药剂防治第15-16页
     ·生物防治第16页
     ·PGPR 菌株防治牡丹根腐病第16-27页
       ·PGPR 的概念第16-17页
       ·PGPR 的种类第17-23页
       ·PGPR 的生防机制第23-27页
   ·微生物多样性第27-37页
     ·微生物多样性研究方法第28-30页
       ·传统的微生物纯培养方法第28-29页
       ·BIOLOG 微平板方法第29页
       ·磷脂脂肪酸分析法第29-30页
     ·分子生物学方法第30-37页
       ·rDNA 克隆文库分析第32-33页
       ·限制性片段长度多态性分析(RFLP)第33页
       ·扩增 rDNA 限制性酶切片段分析(ARDRA)第33-34页
       ·单链构象多态性分析(SSCP)第34页
       ·末端限制性片段长度多态性分析(T-RFLP)第34-35页
       ·变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)第35-37页
   ·本研究的立项背景、研究内容与技术路线第37-40页
     ·本研究的立题背景和研究意义第37-38页
     ·研究内容第38-39页
     ·技术路线第39-40页
2 材料与方法第40-51页
   ·材料第40-44页
     ·根际土样第40页
     ·病原菌第40页
     ·培养基第40页
     ·生化试剂第40页
     ·主要溶液的配置第40-42页
     ·DNA 提取试剂第42页
     ·琼脂糖凝胶电泳试剂第42页
     ·菌株和载体第42-43页
     ·引物第43页
     ·分析软件第43页
     ·主要仪器第43-44页
   ·方法第44-51页
     ·样品的采集第44页
     ·根际土壤总 DNA 的提取第44页
     ·根际土壤宏基因组 DNA 的检测和纯化第44页
     ·T-RFLP 分析第44-45页
       ·用于 T-RFLP 的 PCR第44-45页
       ·PCR 产物的纯化第45页
       ·PCR 产物的限制性内切酶酶切第45页
       ·酶切产物的基因扫描第45页
     ·牡丹根际土壤细菌的 DGGE 分析第45-46页
       ·用于 DGGE 的 PCR 扩增第45-46页
       ·DGGE 电泳分析第46页
       ·DGGE 条带的切割和 DNA 回收测序第46页
       ·PCR 产物切胶回收第46页
     ·牡丹根际土壤真菌 DGGE 分析第46页
     ·回收 DNA 条带连接载体测序第46-47页
       ·连接反应第46-47页
       ·感受态细胞 E. coli DH5α的制备第47页
       ·转化第47页
     ·牡丹根际细菌的分离第47-48页
       ·样品的系列稀释第47页
       ·平板涂布第47-48页
       ·分离物的挑取第48页
     ·牡丹根际根腐病拮抗菌的筛选第48页
       ·拮抗分离物的初筛第48页
       ·拮抗分离物的复筛第48页
       ·菌种保藏第48页
     ·拮抗菌的鉴定第48-51页
       ·拮抗菌的基因组 DNA 的提取第48-49页
       ·拮抗菌的基因组和 16S rDNA 琼脂糖凝胶电泳第49页
       ·拮抗菌的 16S rDNA 序列 PCR 扩增第49-50页
       ·拮抗菌的 PCR 产物纯化第50页
       ·拮抗菌的 PCR 产物浓度的确定第50页
       ·拮抗菌的 16S rDNA 序列测定及分析第50-51页
3 结果与分析第51-65页
   ·根际土壤细菌群落的 T-RFLP 分析第51-54页
     ·用于 T-RFLP 的细菌 16S rDNA 扩增第51页
     ·Hae Ⅲ酶切得到的 T-RF 图谱第51-52页
     ·样品的 T-RFLP 图谱分析第52页
     ·多样性指数分析第52-53页
     ·基于 T-RFLP 的主成分分析第53-54页
   ·根际土壤细菌群落的 DGGE 分析第54-57页
     ·用于 DGGE 的 PCR 扩增第54页
     ·基于 DGGE 的根际土壤中细菌 16S rDNA 多态性分析第54-55页
     ·多样性指数分析第55-56页
     ·基于 DGGE 的细菌种群结构相似性戴斯系数矩阵分析第56页
     ·基于 DGGE 的细菌主成分分析第56-57页
     ·DGGE 细菌条带测序第57页
   ·基于 DGGE 的不同生长年限牡丹根际真菌种群结构多样性分析第57-60页
     ·不同种植年限牡丹根际真菌 DGGE 图谱分析第57-58页
     ·多样性指数分析第58-59页
     ·基于 DGGE 的真菌种群结构戴斯系数矩阵分析第59页
     ·基于 DGGE 的真菌主成分分析第59-60页
   ·牡丹根际拮抗菌的筛选第60页
   ·拮抗菌的鉴定第60-65页
     ·放线菌 MD64 的形态学以及生理生化特征第60页
     ·拮抗细菌的形态学及生理生化特征第60-62页
     ·拮抗菌的 16S rDNA 序列分析第62-65页
4 讨论第65-68页
   ·不同种植年限牡丹根际土壤微生物种群结构的分析第65-66页
     ·T-RFLP 分析第65页
     ·DGGE 分析第65-66页
   ·牡丹根腐病根际拮抗菌的筛选与鉴定第66-68页
5 结论第68-69页
参考文献第69-80页
致谢第80-81页
攻读学位期间发表论文情况第81页

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