| 缩写词 | 第1-15页 |
| 摘要 | 第15-19页 |
| Abstract | 第19-24页 |
| 第一章 引言 | 第24-53页 |
| 1 植物体胚发生的特点和意义 | 第24页 |
| 2 植物激素对体胚发生的诱导和调节研究进展 | 第24-30页 |
| ·生长素对植物体胚的调节作用 | 第25-26页 |
| ·细胞分裂素对植物体胚的调节作用 | 第26页 |
| ·生长素与细胞分裂素对植物体胚的调节作用 | 第26页 |
| ·脱落酸对植物体胚的调节作用 | 第26-27页 |
| ·乙烯对植物体胚的调节作用 | 第27-28页 |
| ·植物体胚发生过程中内源激素的变化 | 第28-29页 |
| ·植物激素对体胚调控的机理 | 第29-30页 |
| 3 植物激素的代谢与信号转导研究进展 | 第30-45页 |
| ·生长素的代谢与信号转导 | 第30-33页 |
| ·生长素的合成 | 第30-31页 |
| ·生长素的分解 | 第31页 |
| ·生长素信号传导机制 | 第31-33页 |
| ·细胞分裂素的代谢与信号转导 | 第33-34页 |
| ·细胞分裂素的代谢 | 第33-34页 |
| ·细胞分裂素的信号转导 | 第34页 |
| ·赤霉素的代谢与信号转导 | 第34-37页 |
| ·赤霉素的代谢 | 第34-36页 |
| ·赤霉素的信号转导 | 第36-37页 |
| ·脱落酸的代谢与信号转导 | 第37-39页 |
| ·脱落酸的代谢 | 第37-38页 |
| ·脱落酸的信号转导 | 第38-39页 |
| ·乙烯的代谢与信号转导 | 第39-41页 |
| ·乙烯的代谢 | 第39-40页 |
| ·乙烯的信号转导 | 第40-41页 |
| ·不同植物激素信号途径中的共性 | 第41-42页 |
| ·五大类激素代谢和信号转导的相互联系 | 第42-45页 |
| 4 激素代谢与信号转导相关基因的研究进展 | 第45-49页 |
| ·生长素受体TIR1/AFBs | 第45页 |
| ·生长素结合蛋白ABP1 | 第45-46页 |
| ·生长素应答因子ARF | 第46页 |
| ·乙烯前体ACC合成酶 | 第46-47页 |
| ·乙烯前体ACC氧化酶 | 第47页 |
| ·乙烯受体ETR1和ERS1 | 第47-49页 |
| 5 生物信息学在基因克隆中的应用 | 第49页 |
| 6 实时荧光定量PCR在体胚上的应用 | 第49-50页 |
| 7 龙眼体胚发生研究进展 | 第50-51页 |
| 8 本研究的意义和主要内容 | 第51-53页 |
| 第二章 龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的克隆 | 第53-88页 |
| 第一节 龙眼胚性愈伤组织生长素受体基因(TIR1)的克隆 | 第54-60页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·总RNA的提取及检测 | 第54页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第54页 |
| ·基因的保守区扩增 | 第54页 |
| ·基因的3’RACE | 第54-55页 |
| ·基因的5’RACE | 第55页 |
| ·基因的开放阅读框(ORF)的扩增 | 第55页 |
| ·目的片段PCR扩增的体系和程序 | 第55-56页 |
| ·目的片段的回收、克隆和测序 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-59页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织总RNA的质量 | 第56页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织TIR1的cDNA全长序列的获得 | 第56-58页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织TIR1的cDNA全长序列和推测的氨基酸序列 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织TIR1进行5’RACE时产物的长度在400-800 bp范围内最佳 | 第59页 |
| ·龙眼体胚是否存在除TIR1之外的TIR1/AFBs受体家族成员 | 第59-60页 |
| ·在龙眼胚性愈伤组织TIR1的cDNA全长序列基础上值得进一步开展研究的方面 | 第60页 |
| 第二节 龙眼胚性愈伤组织生长素结合蛋白基因(ABP1)的克隆 | 第60-64页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-64页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ABP1的cDNA全长序列的获得 | 第62-63页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ABP1的cDNA全长序列和推测的氨基酸序列 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64页 |
| ·选择在特征区内设计引物是龙眼胚性愈伤组织生长素结合蛋白基因ABP1同源克隆成功的关键点 | 第64页 |
| ·生长素受体DL-TIR1与生长素结合蛋白DL-ABP1的相互联系 | 第64页 |
| 第三节 龙眼胚性愈伤组织生长素反应因子基因(ARF)的克隆 | 第64-69页 |
| 1 材料与方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-68页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ARF的cDNA全长序列的获得 | 第66-67页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ARF的cDNA全长序列和推测的氨基酸序列 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| ·多次比对、多次引物设计以确保准确获得龙眼胚性愈伤组织生长素反应因子ARF的cDNA序列全长 | 第69页 |
| ·今后开展ARF这类转录因子的若干研究方向 | 第69页 |
| 第四节 龙眼胚性愈伤组织ACC合成酶基因(ACS)的克隆 | 第69-74页 |
| 1 材料与方法 | 第70-71页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-73页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ACS的cDNA全长序列的获得 | 第71-72页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ACS的cDNA全长序列和推测的氨基酸序列 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-74页 |
| ·不同植物的ACS序列同源性低增加了DL-ACS基因cDNA全长序列获得难度 | 第73-74页 |
| ·今后龙眼ACS基因的若干研究方向 | 第74页 |
| 第五节 龙眼胚性愈伤组织ACC氧化酶基因(ACO)的克隆 | 第74-80页 |
| 1 材料与方法 | 第74-76页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-78页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ACO基因的cDNA和DNA全长序列的获得 | 第76-77页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ACO基因的序列分析 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| ·ACO基因的克隆是较适合采用同源克隆的方法 | 第79页 |
| ·ACO基因反馈调节研究中值得关注的方面 | 第79页 |
| ·ACO基因在龙眼分子生物学研究上的价值 | 第79-80页 |
| 第六节 龙眼胚性愈伤组织两个乙烯受体基因的克隆 | 第80-88页 |
| 1 材料与方法 | 第80-82页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-82页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织DNA和RNA的提取以及cDNA第一链的合成 | 第80页 |
| ·引物的设计合成 | 第80-81页 |
| ·基因的5’端编码区序列的扩增 | 第81页 |
| ·龙眼愈伤组织ERS1基因DNA序列的克隆 | 第81页 |
| ·目的片段PCR扩增的体系和程序 | 第81-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-87页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ETR1和ERS1基因cDNA全长序列、ERS1基因DNA序列的获得 | 第82-84页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ETR1的cDNA全长序列及推测的氨基酸序列 | 第84-85页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织ERS1基因的序列分析 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-88页 |
| ·多次比对进行特异性引物设计确保DL-ETR1和DL-ERS1 cDNA序列的准确性 | 第87页 |
| ·开展不同类型龙眼体胚乙烯受体研究的若干方面 | 第87-88页 |
| 第三章 龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的生物信息学分析 | 第88-181页 |
| 第一节 龙眼胚性愈伤组织生长素受体基因(TIR1)的生物信息学分析 | 第88-102页 |
| 1 材料与方法 | 第88-90页 |
| ·材料 | 第88页 |
| ·方法 | 第88-90页 |
| ·蛋白质基本理化性质预测与分析 | 第88页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第88-89页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第89页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第89页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第89页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第89页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第89页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第89-90页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第90页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测和分析 | 第90页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第90页 |
| ·功能位点预测和分析 | 第90页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-100页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第91-92页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第92页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第92-94页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第94页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第94-95页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第95页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第95-96页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第96-97页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第97-98页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第98页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第98-99页 |
| ·功能点预测和分析 | 第99-100页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| ·F-box结构域对生长素介导的SCF~(DL-TIR1)-ux/IAA结合Aux/IAA蛋白降解是至关重要的 | 第100-101页 |
| ·DL-TIR1蛋白与拟南芥中TIR1/AFBs生长素受体成员的相互关系 | 第101页 |
| ·预测DL-TIR1在龙眼体胚中的作用 | 第101-102页 |
| 第二节 龙眼胚性愈伤组织生长素结合蛋白基因(ABP1)的生物信息学分析 | 第102-115页 |
| 1 材料与方法 | 第102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-113页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第102-104页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第104页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第104-106页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第106-107页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第107页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第107-108页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第108页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第108-110页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第110页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第110-111页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第111-112页 |
| ·功能点预测和分析 | 第112页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第112-113页 |
| 3 讨论 | 第113-115页 |
| ·DL-ABP1很有可能是属内质网型生长素结合蛋白 | 第113-114页 |
| ·DL-ABP1包含典型的ABP1结构和功能位点 | 第114页 |
| ·预测DL-ABP1在龙眼体胚中的作用 | 第114-115页 |
| 第三节 龙眼胚性愈伤组织生长素应答因子基因(ARF)的生物信息学分析 | 第115-129页 |
| 1 材料与方法 | 第115页 |
| 2 结果与分析 | 第115-127页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第115-117页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第117页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第117-119页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第119-120页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第120-121页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第121-122页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第122页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第122-123页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第123-124页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第124-125页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第125-126页 |
| ·功能点预测和分析 | 第126-127页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第127页 |
| 3 讨论 | 第127-129页 |
| ·DL-ARF可能属于转录抑制因子 | 第127-128页 |
| ·DL-ARF生物信息学预测结果包含有典型ARF的结构特点及功能 | 第128页 |
| ·预测DL-ARF在龙眼体胚中的作用 | 第128-129页 |
| 第四节 龙眼胚性愈伤组织ACC合酶基因(ACS)的生物信息学分析 | 第129-141页 |
| 1 材料与方法 | 第129页 |
| 2 结果与分析 | 第129-140页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第129-131页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第131页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第131-133页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第133-134页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第134-135页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第135-136页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第136页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第136-137页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第137-138页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第138-139页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第139页 |
| ·功能点预测和分析 | 第139-140页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第140页 |
| 3 讨论 | 第140-141页 |
| ·DL-ACS可能响应龙眼体胚基础乙烯的合成 | 第141页 |
| ·DL-ACS符合ACS的结构和功能 | 第141页 |
| 第五节 龙眼胚性愈伤组织ACC氧化酶基因(ACO)的生物信息学分析 | 第141-153页 |
| 1 材料与方法 | 第142页 |
| 2 结果与分析 | 第142-151页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第142-143页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第143-144页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第144-146页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第146-147页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第147页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第147页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第147-148页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第148-149页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第149页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第149-150页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第150页 |
| ·功能点预测和分析 | 第150-151页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第151页 |
| 3 讨论 | 第151-153页 |
| ·DL-ACO可能响应龙眼体胚基础乙烯的生成 | 第151-152页 |
| ·DL-ACO预测结果符合已报道ACO的结构和功能 | 第152-153页 |
| 第六节 龙眼胚性愈伤组织乙烯受体基因(ETR1)的生物信息学分析 | 第153-167页 |
| 1 材料与方法 | 第153页 |
| 2 结果与分析 | 第153-166页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第153-155页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第155页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第155-157页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第157-158页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第158-159页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第159页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第159-160页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第160-161页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第161-162页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第162-163页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第163-164页 |
| ·功能点预测和分析 | 第164-165页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第165-166页 |
| 3 讨论 | 第166-167页 |
| ·DL-ETR1可能在龙眼乙烯受体家族中占有突出的功能地位 | 第166-167页 |
| ·DL-ETR1中的Cys65可能与乙烯敏感性有关 | 第167页 |
| 第七节 龙眼胚性愈伤组织乙烯受体基因(ERS1)的生物信息学分析 | 第167-181页 |
| 1 材料与方法 | 第167-168页 |
| 2 结果与分析 | 第168-179页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第168-169页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第169页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化分析 | 第169-172页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第172页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第172-173页 |
| ·三维结构的预测和分析 | 第173页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第173-174页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第174-175页 |
| ·跨膜结构预测与分析 | 第175-176页 |
| ·蛋白质家族及保守结构域的预测分析 | 第176-177页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第177页 |
| ·功能点预测和分析 | 第177-178页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第178-179页 |
| 3 讨论 | 第179-181页 |
| ·DL-ERS1预测结果符合已报道典型ERS1结构和功能 | 第179页 |
| ·DL-ERS1与同源物DL-ETR1在结构功能上的异同点 | 第179-181页 |
| 第四章 龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的定量表达分析 | 第181-198页 |
| 1 材料与方法 | 第181-183页 |
| ·材料 | 第181-182页 |
| ·方法 | 第182-183页 |
| ·总RNA的提取及质量检测 | 第182页 |
| ·两步法qRT-PCR | 第182-183页 |
| 2 结果与分析 | 第183-189页 |
| ·目的基因荧光定量PCR引物的特异性和扩增效率分析 | 第183-184页 |
| ·龙眼体胚发生过程的8个不同阶段目的基因的差异表达分析 | 第184-189页 |
| ·龙眼体胚发生过程生长素相关基因的表达分析 | 第184-186页 |
| ·龙眼体胚发生过程乙烯相关基因的表达分析 | 第186-189页 |
| 3 讨论 | 第189-198页 |
| ·龙眼体胚发生过程中生长素相关基因的差异表达 | 第189-192页 |
| ·龙眼体胚发生过程中生长素相关基因表达量动态变化的相互联系 | 第189-190页 |
| ·DL-TIR1表达的时空差异性与龙眼体胚外源2,4-D以及内源IAA的联系 | 第190-191页 |
| ·龙眼体胚除TIR1外可能还有其它生长素受体成员吗 | 第191-192页 |
| ·龙眼体胚发生过程中乙烯相关基因的差异表达 | 第192-196页 |
| ·龙眼体胚发生过程中乙烯合成相关基因表达量动态变化的相互联系 | 第192-193页 |
| ·DL-ACS,DL-ACO,乙烯受体基因的转录水平是否能够反应乙烯生成量的分析 | 第193页 |
| ·ACO在龙眼体胚发生过程乙烯代谢中的作用 | 第193-194页 |
| ·龙眼体胚发生发育过程中DL-ERS1和DL-ETRl不同的表达模式 | 第194-196页 |
| ·龙眼体胚发生过程中生长素相关基因、乙烯相关基因、龙眼体胚内源IAA的相互联系 | 第196-198页 |
| ·DL-TIR1与DL-ACS表达量的相互关系 | 第196-197页 |
| ·DL-ACO表达的时空差异性与龙眼体胚内源IAA的联系 | 第197页 |
| ·DL-ARF与DL-ACO表达量的相互关系 | 第197-198页 |
| 第五章 小结 | 第198-203页 |
| 1 龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的克隆 | 第198-199页 |
| 2 龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的生物信息学分析 | 第199-201页 |
| 3 龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的定量表达分析 | 第201-203页 |
| ·龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因的表达情况 | 第201页 |
| ·龙眼体胚发生过程中激素代谢与信号转导相关基因表达量相互之间的联系 | 第201-202页 |
| ·龙眼体胚中可能存在生长素和乙烯的整合介导了体胚的生长和发育 | 第202-203页 |
| 参考文献 | 第203-214页 |
| 附录1 | 第214-218页 |
| 附录2 | 第218-221页 |
| 附录3 | 第221-223页 |
| 附录4 | 第223-226页 |
| 附录5 | 第226-229页 |
| 附录6 | 第229-231页 |
| 附录7 | 第231-233页 |
| 附录8 | 第233-236页 |
| 附录9 | 第236-239页 |
| 附录10 | 第239-242页 |
| 附录11 | 第242-246页 |
| 致谢 | 第246页 |
