| 缩略词表 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1 苏云金芽胞杆菌概论 | 第12-13页 |
| 2 几丁质酶的概述 | 第13-15页 |
| ·几丁质酶的研究进展 | 第13页 |
| ·几丁质酶基因结构及其特性的研究 | 第13-14页 |
| ·几丁质酶的应用研究 | 第14-15页 |
| 3 Bt工程菌的研究进展 | 第15-19页 |
| ·外源抗虫基因 | 第15-17页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第15-16页 |
| ·几丁质酶 | 第16页 |
| ·植物外源凝集素 | 第16页 |
| ·淀粉酶抑制剂 | 第16-17页 |
| ·昆虫神经毒素基因 | 第17页 |
| ·Cyt毒素与Cry之间的协同作用 | 第17-18页 |
| ·对Cry毒素的修饰 | 第18页 |
| ·定点突变 | 第18页 |
| ·Hybrid toxins | 第18页 |
| ·Bt工程菌的应用 | 第18-19页 |
| 4 染色体整合技术的研究进展 | 第19-21页 |
| ·外源基因的随机整合 | 第19-20页 |
| ·外源基因的定点整合 | 第20-21页 |
| 5 Red/ET同源重组 | 第21-23页 |
| ·Red/ET同源重组技术简介 | 第21-22页 |
| ·Red/ET同源重组的原理及应用 | 第22-23页 |
| 6 立体依据与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料和方法 | 第25-36页 |
| 1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2 培养基和抗生素 | 第25-26页 |
| 3 试剂和引物 | 第26-28页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第26页 |
| ·XBU001感受态制备及转化试剂 | 第26页 |
| ·蛋白质电泳试剂 | 第26-27页 |
| ·胶内酶解用试剂 | 第27页 |
| ·几丁质酶活性测定试剂 | 第27页 |
| ·室内生测材料及试剂 | 第27-28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| 4 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 5 试验方法 | 第29-36页 |
| ·PCR扩增烟草几丁质酶基因 | 第29页 |
| ·质粒pHT2Aa-vip3A提取以及酶切后线性片段的回收 | 第29-30页 |
| ·Red/ET同源重组技术构建重组质粒pHTtchiB | 第30页 |
| ·重组质粒pHTtchiB电转化XBU001 | 第30-31页 |
| ·重组菌株XBtchiB中几丁质酶的SDS-PAGE检测及质谱鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pHTtchiB电转化HD73 | 第32页 |
| ·重组菌株HDtchiB中几丁质酶的SDS-PAGE检测及质谱鉴定 | 第32页 |
| ·重组菌株HDtchiB生长曲线的测定 | 第32页 |
| ·重组菌株HDtchiB的形态学观察 | 第32页 |
| ·重组菌株HDtchiB中几丁质酶的活性测定 | 第32-33页 |
| ·重组菌株HDtchiB的生物活性测定 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增p2Aa-tchiB-1Act基因片段 | 第34页 |
| ·质粒pKCHIUN提取以及酶切后线性片段的回收 | 第34页 |
| ·Red/ET同源重组技术构建定点整合质粒pKTCHIUN | 第34页 |
| ·重组质粒pKTCHIUN电转化XBU001 | 第34页 |
| ·重组菌株KTCHIUN的筛选 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-54页 |
| 1 chi基因上、下游片段序列 | 第36-37页 |
| 2 整合质粒pKTCHIUN的构建 | 第37-44页 |
| ·重组质粒pHTtchiB的构建 | 第38-40页 |
| ·整合载体pKTCHIUN的构建 | 第40-44页 |
| 3 重组质粒pHTtchiB电转化无晶体突变株XBU001 | 第44-48页 |
| 4 重组质粒pHTtchiB电转化HD73 | 第48-51页 |
| 5 HDtchiB重组菌株生长特性 | 第51页 |
| 6 HDtchiB重组菌株形态学观察 | 第51-52页 |
| 7 HDtchiB中几丁质酶酶活力测定 | 第52-53页 |
| 8 HDtchiB生物活性测定 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-58页 |
| 1 外源基因的选择 | 第54页 |
| 2 实现外源基因高效表达的策略及其苏云金杆菌工程菌的构建 | 第54-55页 |
| 3 Red/ET同源重组技术在构建重组载体中的应用 | 第55-56页 |
| 4 染色体定点整合技术及其整合位点的选择 | 第56-58页 |
| 主要结论和今后的研究设想 | 第58-60页 |
| 1 本研究的主要结论 | 第58页 |
| 2 今后工作设想 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第68-69页 |
| 课题受资助的基金项目 | 第69-70页 |
