| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-30页 |
| 1.动脉粥样硬化及其相关的心脑血管疾病严重危害人类健康 | 第11页 |
| 2.动脉粥样硬化发生是一个多因素多环节的漫长过程 | 第11-18页 |
| ·动脉粥样硬化的复杂病理过程 | 第11-14页 |
| ·动脉粥样硬化是多系统多因素长期相互作用的结果 | 第14-18页 |
| ·脂类代谢紊乱学说 | 第15页 |
| ·内皮损伤学说 | 第15-16页 |
| ·炎症反应学说 | 第16-17页 |
| ·三种经典学说的关系 | 第17-18页 |
| 3.OxLDL是动脉粥样硬化起始和进展的重要因素 | 第18-25页 |
| ·Ox-LDL的生成机制及影响因素 | 第18-20页 |
| ·OxLDL对动脉壁的影响 | 第20-25页 |
| ·OxLDL与血管内皮细胞损伤 | 第20页 |
| ·OxLDL促进血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖与迁移 | 第20-21页 |
| ·OxLDL对巨噬细胞中作用 | 第21-25页 |
| ·OxLDL的摄取和降解 | 第21-22页 |
| ·Ox-LDL对巨噬细胞功能的影响 | 第22-25页 |
| ·诱导巨噬细胞的黏附、趋化和分化 | 第22-23页 |
| ·对泡沫细胞形成的影响 | 第23-24页 |
| ·对巨噬细胞增殖的调控 | 第24页 |
| ·Ox-LDL诱导巨噬细胞的凋亡 | 第24-25页 |
| ·OxLDL对细胞生长因子、组织因子及前列腺素类物质代谢的影响 | 第25页 |
| 4.对氧磷酶(PON)和oxLDL以及动脉粥样硬化的关系 | 第25-28页 |
| ·对氧磷酶(PON)家族介绍 | 第25-26页 |
| ·PON家族成员和oxLDL的关系 | 第26-27页 |
| ·PON家族成员在动脉粥样硬化中起的作用 | 第27-28页 |
| ·PON1和动脉粥样硬化的关系 | 第27页 |
| ·PON2与动脉粥样硬化的关系 | 第27-28页 |
| ·PON3和动脉粥样硬化的关系 | 第28页 |
| 5.PON基因簇对动脉粥样硬化的作用是本研究的要点 | 第28-30页 |
| 实验材料 | 第30-33页 |
| 1.转基因用细菌人工染色体(BAC) | 第30页 |
| 2.实验用小鼠及饲料 | 第30页 |
| 3.限制性内切酶和其他修饰酶 | 第30-31页 |
| 4.其他主要试剂 | 第31页 |
| 5.放射性核素 | 第31页 |
| 6.主要仪器设备 | 第31-33页 |
| 实验方法 | 第33-58页 |
| 1.显微注射用BAC的分析与鉴定 | 第33-34页 |
| ·PCR鉴定BAC RP11-104H16序列的正确性及完整性 | 第33页 |
| ·脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定BAC RP11-104H16的大小 | 第33-34页 |
| 2.显微注射用质粒DNA的制备与纯化 | 第34-35页 |
| 3.受精卵培养基的配制与保存 | 第35-37页 |
| ·M2和M16储存液的成分及配制 | 第35-36页 |
| ·M2和M16工作液的配制 | 第36-37页 |
| 4.小鼠的选择与处理 | 第37-38页 |
| 5.超排卵和取卵 | 第38页 |
| 6.显微注射 | 第38-41页 |
| ·持卵针的制备 | 第38-39页 |
| ·显微注射针的拉制 | 第39-40页 |
| ·显微注射槽的制备 | 第40页 |
| ·显微注射 | 第40-41页 |
| 7.输卵管移卵 | 第41-42页 |
| ·移卵针的制备 | 第41页 |
| ·受精卵在移卵针中的排列 | 第41页 |
| ·输卵管移卵 | 第41-42页 |
| 8.转基因鼠的检测 | 第42-45页 |
| ·利用PCR鉴定转基因鼠 | 第42-43页 |
| ·利用Southern杂交鉴定转基因鼠 | 第43-45页 |
| ·鼠尾基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·Southern杂交鉴定转基因鼠探针制备 | 第44页 |
| ·Southern杂交鉴定转基因鼠 | 第44-45页 |
| 9.转基因鼠的传代,与apoE~(--)鼠的杂交和基因型鉴定,喂高脂饮食诱发动脉粥样硬化 | 第45页 |
| ·转基因鼠传代 | 第45页 |
| ·转基因鼠与apoE~(--)鼠的杂交和基因型鉴定 | 第45页 |
| ·喂高脂饮食诱发动脉粥样硬化 | 第45页 |
| 10.小鼠组织器官的采集和保存 | 第45-46页 |
| 11.组织RNA提取 | 第46-47页 |
| 12.逆转录PCR(RT-PCR) | 第47页 |
| 13.组织蛋白提取部分 | 第47-48页 |
| ·蛋白提取缓冲液RIPA的成分 | 第47页 |
| ·用RIPA缓冲液提取组织蛋白 | 第47-48页 |
| 14.Western blot | 第48-49页 |
| ·变性PAGE胶电泳 | 第48页 |
| ·转膜 | 第48-49页 |
| ·免疫反应 | 第49页 |
| ·ECL反应 | 第49页 |
| 15.小鼠HDL的分离及脱脂 | 第49-51页 |
| ·小鼠HDL的分离 | 第49-50页 |
| ·脂蛋白脱脂 | 第50-51页 |
| 16.PON活性检测 | 第51页 |
| 17.LDL氧化保护实验 | 第51-52页 |
| ·人LDL氧化诱导 | 第51页 |
| ·FOX实验测定样品中的脂质过氧化物 | 第51-52页 |
| 18.小鼠血压测定 | 第52页 |
| 19.小鼠主动脉整体油红0染色、动脉粥样斑块分析 | 第52-53页 |
| ·主动脉整体油红0染色 | 第52-53页 |
| ·粥样斑块分析 | 第53页 |
| 20.小鼠血脂血糖浓度测定 | 第53页 |
| 21.组织切片、HE染色和免疫组化 | 第53-55页 |
| ·组织切片 | 第53-54页 |
| ·HE染色 | 第54页 |
| ·免疫组化 | 第54-55页 |
| 22.小鼠血清ICAM-1和MCP-1测定 | 第55-56页 |
| 23.小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)相关实验 | 第56-57页 |
| ·MPM的分离培养 | 第56页 |
| ·MPM产生活性氧(ROS)的测定 | 第56页 |
| ·oxLDL刺激MPM分泌IL-6和TNF-α检测 | 第56-57页 |
| ·泡沫细胞形成实验 | 第57页 |
| ·MMP-9检测 | 第57页 |
| 24.统计学方法 | 第57-58页 |
| 实验结果 | 第58-77页 |
| 1.BAC RP11-104H16的包含人完整PON基因簇元件 | 第58-59页 |
| 2.显微注射用DNA的制备 | 第59页 |
| 3.PON基因簇转基因鼠系的建立 | 第59-60页 |
| 4.转基因在小鼠体内正确的表达 | 第60-64页 |
| 5.转基因鼠在正常条件无明显表型 | 第64-65页 |
| 6.h PC~+/apoE~(--)鼠系的建立 | 第65页 |
| 7.PC转基因对动脉粥样硬化的发生有抑制作用 | 第65-69页 |
| 8.PC转基因对动脉粥样硬化斑块的稳定性有促进作用 | 第69-71页 |
| 9.PC转基因加强了小鼠HDL的氧化保护作用 | 第71-72页 |
| 10.PC转基因小鼠血清黏附分子降低 | 第72-73页 |
| 11.PC转基因抑制小鼠巨噬细胞的促动脉粥样硬化作用 | 第73-77页 |
| 讨论 | 第77-85页 |
| 1.本研究概述 | 第77页 |
| 2.PON基因簇转基因可能并不影响脂质和糖代谢 | 第77-78页 |
| ·脂质代谢和糖代谢紊乱可以导致动脉粥硬化 | 第77-78页 |
| ·PON不能直接改变脂质代谢和糖代谢 | 第78页 |
| 3.PON对动脉粥样硬化的抑制 | 第78-80页 |
| ·PON基因簇明确抑制动脉粥样硬化 | 第78页 |
| ·PON基因簇抑制动脉粥样硬化与单个基因转基因比较 | 第78-80页 |
| 4.PON对动脉粥样硬化斑块稳定性的作用 | 第80-82页 |
| ·动脉粥样硬化斑块破裂及其危害 | 第80-81页 |
| ·PON基因簇转基因抑制动脉粥样硬化斑块破裂 | 第81-82页 |
| 5.PON基因簇作用于动脉粥样硬化的其他可能机制及其机制总结 | 第82-83页 |
| 6.本研究的结论及展望 | 第83-84页 |
| 7.本研究的不足及进一步设想 | 第84-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 文献综述 | 第93-114页 |
| Reference | 第104-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简历 | 第115-117页 |
