| 第一部分 | 第1-23页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 1 引言 | 第9-11页 |
| 2 材料与方法 | 第11页 |
| ·材料和试剂 | 第11页 |
| ·仪器 | 第11页 |
| 3 实验方法 | 第11-16页 |
| ·重组质粒pSUPER-shRNA的构建和鉴定 | 第11-14页 |
| ·靶点的选择与设计 | 第11-12页 |
| ·寡核苷酸退火 | 第12-13页 |
| ·载体的线性化 | 第13页 |
| ·连接寡核苷酸与载体 | 第13页 |
| ·转化感受态细胞 | 第13-14页 |
| ·质粒提取和阳性克隆的鉴定 | 第14页 |
| ·阳性克隆的再扩增 | 第14页 |
| ·细胞培养及转染 | 第14-15页 |
| ·细胞总RNA的抽提及定量 | 第15页 |
| ·RT-PCR检测小鼠ZNF313mRNA的表达 | 第15页 |
| ·Wetern blot杂交 | 第15-16页 |
| 4 结果 | 第16-20页 |
| ·重组质粒pSUPER-shRNA的构建和鉴定 | 第16-17页 |
| ·细胞培养及转染 | 第17-18页 |
| ·ZNF313mRNA的RT-PCR检测 | 第18-19页 |
| ·Western blot检测 | 第19-20页 |
| 5 讨论 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| 第二部分 人ZNF313基因的启动子克隆分析及其荧光蛋白融合表达载体在细胞中的定位 | 第23-39页 |
| 摘要 | 第23-24页 |
| Abstract | 第24-26页 |
| 1引言 | 第26-27页 |
| 2材料与方法 | 第27-30页 |
| ·材料和试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·设计合成扩增人ZNF313基因启动子的PCR引物 | 第27-28页 |
| ·重组荧光素酶报告基因表达载体的构建 | 第28页 |
| ·重组荧光融合蛋白基因表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·细胞培养 | 第29页 |
| ·重组荧光素酶报告基因表达载体转染H293T细晌系 | 第29页 |
| ·重组真核表达载体pEGFP-ZNF313转染H293T细胞系 | 第29页 |
| ·荧光素酶相对活性测定 | 第29页 |
| ·荧光显微镜观察ZNF313在H293T细胞中的表达情况 | 第29-30页 |
| 3结果 | 第30-34页 |
| ·人ZNF基因启动子的软件分析和引物设计 | 第30页 |
| ·人ZNF基因启动子区四个不同片段的PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| ·人ZNF313甚因启动子四种荧光素酶表达载体的构建 | 第31页 |
| ·人ZNF基因启动子的荧光素酶相对活性分析 | 第31-32页 |
| ·重组真核表达质粒pEGFP-ZNF313的构建 | 第32页 |
| ·人ZNF313在H393T细胞中的表达情况及定位 | 第32-34页 |
| 4讨论 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 综述 RNA干涉和疾病治疗 | 第39-47页 |
| 引言 | 第39页 |
| 1 RNAi用于抗HBV、HCV治疗 | 第39-40页 |
| 2 RNAi与抗HIV感染 | 第40-41页 |
| 3 RNAi与神经系统疾病 | 第41-43页 |
| ·阿尔茨海默病 | 第42页 |
| ·poly(Q)疾病 | 第42-43页 |
| ·遗传性痉挛截瘫 | 第43页 |
| 4 RNAi与其它疾病 | 第43页 |
| 5 前景与展望 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 附录 | 第47-49页 |
| 发表论文 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
