| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-22页 |
| 1 犬瘟热以及病毒的概况 | 第10-15页 |
| ·病原学 | 第10-11页 |
| ·发生与分布 | 第11-12页 |
| ·临床症状 | 第12页 |
| ·病理学特征 | 第12页 |
| ·预防免疫和治疗 | 第12-15页 |
| 2 犬瘟热分离诊断方法的研究现状 | 第15-18页 |
| ·CDV分离培养鉴定 | 第15页 |
| ·包涵体检查法 | 第15-16页 |
| ·电镜诊断 | 第16页 |
| ·免疫学检查方法 | 第16-17页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第17-18页 |
| ·核酸杂交技术 | 第17-18页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第18页 |
| 3 犬瘟热病毒相关蛋白及其基因的研究现状 | 第18-21页 |
| ·核衣壳(N)蛋白及其基因 | 第19页 |
| ·磷(P)蛋白及其基因 | 第19-20页 |
| ·基质膜(M)蛋白及其基因 | 第20页 |
| ·大(L)蛋白及其基因 | 第20页 |
| ·融合(F)蛋白及其基因 | 第20-21页 |
| ·附着或血凝(H)蛋白及其基因 | 第21页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第一章 犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立 | 第22-28页 |
| 1 材料和方法 | 第22-24页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·引物的设计和合成 | 第23页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第23页 |
| ·RT-PCR检测方法的建立 | 第23-24页 |
| ·病料检测结果: | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-26页 |
| ·引物浓度摸索的结果: | 第24-25页 |
| ·镁离子浓度的摸索结果: | 第25页 |
| ·退火温度摸索结果: | 第25页 |
| ·特异性实验结果 | 第25-26页 |
| ·RT—PCR病料检测结果 | 第26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 4 结论 | 第27-28页 |
| 第二章 SYBR GREEN Ⅰ荧光RT-PCR检测犬瘟热方法的建立和应用 | 第28-35页 |
| 1 材料和方法 | 第29-30页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-30页 |
| ·引物的设计合成 | 第29页 |
| ·病料的采集 | 第29-30页 |
| ·病毒RNA提取 | 第30页 |
| ·Sybr Green Ⅰ RT-PCR检测CDV方法的建立 | 第30页 |
| ·临床样本的检测 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-33页 |
| ·引物浓度的摸索 | 第30-31页 |
| ·引物特异性的检验结果 | 第31页 |
| ·敏感性实验 | 第31-32页 |
| ·样本检测结果 | 第32页 |
| ·电泳证实结果 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 4 结论 | 第34-35页 |
| 第三章 TAQMAN实时荧光定量PCR检测犬瘟热病毒方法的建立 | 第35-43页 |
| 1 材料和方法 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·引物的设计合成 | 第36页 |
| ·病毒RNA提取 | 第36页 |
| ·实时荧光PCR方法的建立 | 第36-37页 |
| ·重组标准品质粒的制备 | 第37页 |
| ·标准曲线的建立 | 第37页 |
| ·特异性实验 | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR稳定性实验 | 第38页 |
| ·Taqman实时荧光定量PCR的应用 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·引物浓度的摸索 | 第38页 |
| ·探针浓度的摸索结果 | 第38-39页 |
| ·MG~(2+)浓度的摸索 | 第39页 |
| ·标准曲线的构建结果 | 第39-40页 |
| ·临床病料的检测结果 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第41页 |
| ·实时荧光PCR影响因素分析和优化方案 | 第41-42页 |
| ·实时荧光PCR技术在动物疫病诊断中的应用 | 第42页 |
| 4 结论 | 第42-43页 |
| 第四章 犬瘟热病毒F基因克隆及序列分析 | 第43-56页 |
| 1 材料和方法 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43-46页 |
| ·毒株、病料、质粒 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·培养基、溶液 | 第44-45页 |
| ·仪器 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-50页 |
| ·引物的设计合成 | 第46页 |
| ·病毒RNA提取 | 第46页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备 | 第46-47页 |
| ·F基因的RT-PCR扩增 | 第47页 |
| ·扩增片段的凝胶回收及克隆转化 | 第47-50页 |
| ·基因测序比较 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·引物41扩增产物回收纯化后的电泳结果 | 第50页 |
| ·引物42扩增产物回收纯化后的电泳结果 | 第50-51页 |
| ·引物43扩增产物回收纯化后的电泳结果 | 第51页 |
| ·犬瘟热病毒厦门分离株F蛋白基因测序结果 | 第51-52页 |
| ·临床病料中CDV株F基因测序后的比较分析结果 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| ·CDV野外株与基因库中已发表序列的差异 | 第53-54页 |
| ·CDV F基因蛋白的生物学特性 | 第54-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 全文结论 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 参考文献: | 第58-64页 |
| 英文缩略符号说明 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
