| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 热应激蛋白(HSP)基因的研究进展 | 第13-15页 |
| ·HSP70基因的结构特征 | 第13-14页 |
| ·HSP70家族的基因转录、表达及调控 | 第14-15页 |
| 2 一氧化氮合酶(NOS)基因的研究进展 | 第15-16页 |
| ·NOS的生物学特性 | 第15页 |
| ·NOS基因的结构 | 第15-16页 |
| 3 PCR-SSCP技术及其研究进展 | 第16-20页 |
| ·PCR-SSCP的建立 | 第16-17页 |
| ·PCR-SSCP技术的基本原理 | 第17-18页 |
| ·PCR-SSCP技术的特点 | 第18-19页 |
| ·PCR-SSCP分析注意事项 | 第19-20页 |
| 4 单核苷酸多态性(SNP)研究进展及应用前景 | 第20-24页 |
| ·SNP及其研究背景 | 第20-22页 |
| ·SNP作为一种分子标记的优势 | 第22页 |
| ·数量多、分布广 | 第22页 |
| ·具有遗传稳定性 | 第22页 |
| ·易实现分析的自动化 | 第22页 |
| ·等位基因频率容易估计、易于基因分型 | 第22页 |
| ·SNP的检测方法 | 第22-23页 |
| ·SNP研究的意义 | 第23-24页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 热应激对奶牛抗氧化能力的影响 | 第25-29页 |
| 1 材料与方法 | 第25页 |
| ·实验动物与测定条件 | 第25页 |
| ·采集血样 | 第25页 |
| ·测定方法 | 第25页 |
| ·数据处理 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-27页 |
| ·热应激期两个群体奶牛血清中的抗氧化指标 | 第25-26页 |
| ·非热应激期两个群体奶牛血清中的抗氧化指标 | 第26页 |
| ·不同温度下两个群体奶牛血清中抗氧化指标的变化 | 第26-27页 |
| 3 小结与讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 奶牛HSP基因和NOS3基因SNP分析 | 第29-66页 |
| 第一部分 材料与方法 | 第29-41页 |
| 1 实验材料 | 第29页 |
| ·实验牛的来源 | 第29页 |
| ·采样方法 | 第29页 |
| 2 主要仪器设备及试剂、溶液的来源与配制 | 第29-33页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要试剂及来源 | 第30页 |
| ·常用溶液及试剂的配制 | 第30-33页 |
| ·提取DNA所需试剂的配制 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳所用试剂的配制 | 第32-33页 |
| 3 实验方法 | 第33-41页 |
| ·实验牛血液基因组DNA的提取及检测 | 第33-34页 |
| ·血液DNA提取 | 第33页 |
| ·基因组DNA浓度和纯度的检测 | 第33-34页 |
| ·DNA浓度和纯度的测定 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第34页 |
| ·模板DNA稀释 | 第34页 |
| ·牛HSP基因及NOS3基因的PCR扩增 | 第34-37页 |
| ·引物的设计与合成 | 第34-35页 |
| ·引物溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·PCR反应体系的建立以及反应条件的优化 | 第36页 |
| ·PCR扩增产物的检测 | 第36-37页 |
| ·牛HSP基因及NOS3基因的SSCP分析 | 第37-38页 |
| ·SSCP步骤 | 第37页 |
| ·银染步骤 | 第37-38页 |
| ·测序 | 第38-39页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第38-39页 |
| ·PCR回收产物的序列测定 | 第39页 |
| ·统计分析 | 第39-41页 |
| ·基因频率和基因型频率的计算 | 第39页 |
| ·多态信息含量(polymorphism information content,PIC) | 第39页 |
| ·遗传杂合度 | 第39-40页 |
| ·Hardy-Weinberg平衡检测 | 第40页 |
| ·统计分析模型 | 第40-41页 |
| 第二部分 结果与分析 | 第41-66页 |
| 1 基因组DNA提取效果 | 第41页 |
| 2 PCR-SSCP多态性检测结果 | 第41-50页 |
| ·HSPA8-exon1、exon4、exon6的PCR-SSCP分析 | 第41-43页 |
| ·PCR扩增结果 | 第41-42页 |
| ·HSPA8-exon1、exon4、exon6的SSCP分析 | 第42-43页 |
| ·HSPA8基因intron7的PCR-SSCP分析 | 第43-44页 |
| ·PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| ·HSPA8-intron7的SSCP电泳结果 | 第44页 |
| ·HSPA3-exon1基因的PCR-SSCP分析 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| ·HSPA3-exon1的SSCP电泳结果 | 第45页 |
| ·NOS3-exon3基因的PCR-SSCP分析 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增结果 | 第45页 |
| ·NOS3-exon3的SSCP电泳结果 | 第45-46页 |
| ·NOS3-exon4基因的PCR-SSCP分析 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增结果 | 第46页 |
| ·NOS3-exon4的SSCP电泳结果 | 第46-47页 |
| ·NOS3-exon8基因的PCR-SSCP分析 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增结果 | 第47页 |
| ·NOS3-exon8的SSCP电泳结果 | 第47-48页 |
| ·NOS3-exon13基因的PCR-SSCP分析 | 第48-49页 |
| ·PCR扩增结果 | 第48页 |
| ·NOS3-exon13的SSCP电泳结果 | 第48-49页 |
| ·NOS3-exon16基因的PCR-SSCP分析 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增结果 | 第49页 |
| ·NOS3-exon16的SSCP电泳结果 | 第49-50页 |
| 3 突变位点的群体遗传学研究结果 | 第50-62页 |
| ·基因频率、基因型频率和遗传多态性分析 | 第50-53页 |
| ·不同群体七个位点基因型分布的差异显著性检验 | 第53页 |
| ·Hardy-Weinberg平衡的检验 | 第53-54页 |
| ·测序结果分析 | 第54-56页 |
| ·多态位点与奶牛血清生化指标的相关性分析 | 第56-62页 |
| ·荷斯坦牛NOS3基因不同位点多态性与NOS活力关联分析 | 第56-57页 |
| ·荷-娟F_1 NOS3基因不同位点多态性与NOS活力关联分析 | 第57-58页 |
| ·荷-娟F_1牛HSP基因多态性与血清抗氧化指标的关联分析 | 第58-60页 |
| ·荷斯坦牛HSP基因多态性与血清生化指标的关联分析 | 第60-62页 |
| 4 讨论与分析 | 第62-66页 |
| ·SSCP结果的分析 | 第62页 |
| ·基因突变情况 | 第62-63页 |
| ·基因型分布的检验 | 第63页 |
| ·HSP和NOS3基因群体遗传特性的分析 | 第63-64页 |
| ·基因多态性与血清生化指标的相关性分析 | 第64-66页 |
| ·NOS3基因多态性与NOS活力的关系 | 第64-65页 |
| ·HSP基因多态性与T-AOC、MDA和T-SOD的关系 | 第65-66页 |
| 第四章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
