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流感病毒诱导神经胶质细胞的病理变化及天然免疫反应

中文摘要第1-7页
Abstract第7-10页
英文缩略词表第10-16页
第一章 绪论第16-33页
   ·流感病毒及其反向遗传系统第16-18页
   ·流感病毒与中枢神经系统感染第18-20页
   ·抗病毒细胞因子与APOBEC 家族第20-22页
   ·论文的研究目的、意义及内容第22页
   ·参考文献第22-33页
第二章 流感病毒H1N1 和H5N1 全基因组克隆及反向遗传载体的构建第33-59页
   ·材料与方法第33-41页
     ·病毒及生物安全操作第33页
     ·分子生物学、免疫学、细胞培养及病毒学的常规操作第33-34页
     ·流感病毒毒株及细胞第34页
     ·病毒的空斑纯化第34页
     ·反向遗传双向转录/表达通用载体的构建第34-39页
     ·病毒基因组RNA 的提取第39页
     ·病毒基因组RNA 的反转录第39页
     ·病毒基因组片段的PCR第39-41页
     ·流感病毒8 质粒反向遗传质粒的构建第41页
     ·流感病毒H1N1 和H5N1 基因组测序及分析第41页
   ·结果第41-52页
     ·两株流感病毒在MDCK 细胞上的增殖特性第41-43页
     ·人流感病毒A/Shantou/169/06(H1N1)全基因组8 片段RT-PCR第43-44页
     ·禽流感病毒A第44页
     ·反向遗传通用载体的构建与鉴定第44-46页
     ·禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/1/2005 基因组序列第46-51页
     ·人流感病毒A/Shantou/169/2006 基因组序列第51页
     ·含有H1N1 及H5N1 病毒全基因组片段的反向遗传质粒的构建第51-52页
   ·讨论第52-54页
   ·小结第54页
   ·参考文献第54-59页
第三章 流感病毒诱导胶质细胞凋亡及炎症因子释放第59-93页
   ·材料与方法第59-69页
     ·实验动物第59页
     ·病毒及生物安全操作第59页
     ·流感病毒毒株第59页
     ·流感病毒的纯化第59-60页
     ·新生小鼠大脑皮层神经胶质细胞的培养第60页
     ·小鼠大脑皮层小胶质细胞与星形胶质细胞的分离第60-61页
     ·免疫荧光及流式细胞术检测小胶质细胞与星形胶质细胞的纯度第61-62页
     ·流感病毒受体的检测第62页
     ·流感病毒感染神经胶质细胞第62页
     ·流感病毒空斑检测第62-63页
     ·流感病毒在胶质细胞中的生长曲线第63页
     ·Annexin V/ PI 双染法检测细胞凋亡第63页
     ·流感病毒核蛋白的免疫荧光检测第63-64页
     ·胶质细胞RNA 的提取及反转录第64页
     ·小鼠胶质细胞感染流感病毒后炎症相关因子的半定量PCR 检测第64-66页
     ·酶联免疫吸附实验(ELISA)第66-67页
     ·小鼠胶质细胞感染流感病毒后抗病毒因子的表达变化检测第67页
     ·人胶质细胞的分离与培养第67-68页
     ·人胶质细胞感染流感病毒后APOBEC 家族基因表达变化检测第68-69页
   ·结果第69-85页
     ·小鼠胶质细胞的分离与培养第69页
     ·小胶质细胞与星形胶质细胞的纯度鉴定第69-71页
     ·胶质细胞表面的流感病毒受体分布第71页
     ·流感病毒感染小胶质细胞和星形胶质细胞第71-73页
     ·流感病毒在小胶质细胞和星形胶质细胞中的复制动力学第73-74页
     ·流感病毒感染诱导的神经胶质细胞凋亡第74-75页
     ·流感病毒感染神经胶质细胞后炎症相关细胞因子基因表达变化第75-78页
     ·流感病毒感染后胶质细胞IL-1β分泌上调第78-79页
     ·流感病毒感染后胶质细胞IL-6 分泌上调第79-80页
     ·流感病毒感染后胶质细胞TNF-α分泌上调第80-81页
     ·流感病毒感染后胶质细胞抗病毒因子表达变化第81-83页
     ·人原代神经胶质细胞的分离与培养第83页
     ·人胶质细胞感染流感病毒后APOBEC 家族基因表达变化第83-85页
   ·讨论第85-88页
   ·小结第88页
   ·参考文献第88-93页
第四章 APOBEC 家族基因的克隆表达及其对流感病毒复制的影响第93-118页
   ·材料与方法第93-102页
     ·质粒第93-94页
     ·细胞及培养基第94页
     ·引物第94页
     ·APOBEC 家族基因的克隆第94-98页
     ·稳定表达hA3F 和hA3G 的MDCK 细胞系的构建第98-99页
     ·hA3F 和hA3G 蛋白的细胞定位检测第99-100页
     ·MDCK 及A549 细胞的转染第100页
     ·半数组织培养感染剂量(TCID50)检测第100页
     ·流感病毒在稳定表达hA3F 和hA3G 的MDCK 细胞中复制效率检测第100-101页
     ·其它APOBEC 家族蛋白对流感病毒复制效率的影响第101页
     ·hA3F 和hA3G 在HepG2.2.15 细胞模型上抑制HBV 复制效率的检测第101-102页
     ·流感病毒基因组突变率的检测第102页
   ·结果第102-112页
     ·APOBEC 家族基因的克隆及表达载体的构建第102-104页
     ·hA3F 和hA3G 表达细胞系的Western blotting 检测第104页
     ·hA3F 和hA3G 表达细胞系中阳性表达细胞的比例第104-106页
     ·hA3F 和hA3G 重组蛋白在细胞内的定位第106页
     ·流感病毒在hA3F 和hA3G 表达细胞中的TCID50 滴度第106-107页
     ·流感病毒在稳定表达hA3F 和hA3G 的MDCK 细胞中的空斑滴度第107-108页
     ·不同感染剂量流感病毒在MDCK 细胞中各时相的复制效率第108-109页
     ·流感病毒感染后细胞hA3F 和hA3G 表达水平第109-110页
     ·hA3F 和hA3G 表达载体在HepG2.2.15 细胞中抑制HBV 复制第110页
     ·其它APOBEC 家族蛋白对流感病毒复制的影响第110-112页
     ·hA3F 和hA3G 对流感病毒基因组无显著的超突变作用第112页
   ·讨论第112-115页
   ·小结第115页
   ·参考文献第115-118页
附录1 流感病毒A/Shantou/169/2006(H1N1)氨基酸序列第118-122页
附录2 APOBEC 家族成员DNA 序列第122-128页
结论第128-129页
论文的创新点第129-130页
博士期间发表及待发表的论文第130-131页
研究生简历第131-132页
致谢第132-133页

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