中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-10页 |
英文缩略词表 | 第10-16页 |
第一章 绪论 | 第16-33页 |
·流感病毒及其反向遗传系统 | 第16-18页 |
·流感病毒与中枢神经系统感染 | 第18-20页 |
·抗病毒细胞因子与APOBEC 家族 | 第20-22页 |
·论文的研究目的、意义及内容 | 第22页 |
·参考文献 | 第22-33页 |
第二章 流感病毒H1N1 和H5N1 全基因组克隆及反向遗传载体的构建 | 第33-59页 |
·材料与方法 | 第33-41页 |
·病毒及生物安全操作 | 第33页 |
·分子生物学、免疫学、细胞培养及病毒学的常规操作 | 第33-34页 |
·流感病毒毒株及细胞 | 第34页 |
·病毒的空斑纯化 | 第34页 |
·反向遗传双向转录/表达通用载体的构建 | 第34-39页 |
·病毒基因组RNA 的提取 | 第39页 |
·病毒基因组RNA 的反转录 | 第39页 |
·病毒基因组片段的PCR | 第39-41页 |
·流感病毒8 质粒反向遗传质粒的构建 | 第41页 |
·流感病毒H1N1 和H5N1 基因组测序及分析 | 第41页 |
·结果 | 第41-52页 |
·两株流感病毒在MDCK 细胞上的增殖特性 | 第41-43页 |
·人流感病毒A/Shantou/169/06(H1N1)全基因组8 片段RT-PCR | 第43-44页 |
·禽流感病毒A | 第44页 |
·反向遗传通用载体的构建与鉴定 | 第44-46页 |
·禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/1/2005 基因组序列 | 第46-51页 |
·人流感病毒A/Shantou/169/2006 基因组序列 | 第51页 |
·含有H1N1 及H5N1 病毒全基因组片段的反向遗传质粒的构建 | 第51-52页 |
·讨论 | 第52-54页 |
·小结 | 第54页 |
·参考文献 | 第54-59页 |
第三章 流感病毒诱导胶质细胞凋亡及炎症因子释放 | 第59-93页 |
·材料与方法 | 第59-69页 |
·实验动物 | 第59页 |
·病毒及生物安全操作 | 第59页 |
·流感病毒毒株 | 第59页 |
·流感病毒的纯化 | 第59-60页 |
·新生小鼠大脑皮层神经胶质细胞的培养 | 第60页 |
·小鼠大脑皮层小胶质细胞与星形胶质细胞的分离 | 第60-61页 |
·免疫荧光及流式细胞术检测小胶质细胞与星形胶质细胞的纯度 | 第61-62页 |
·流感病毒受体的检测 | 第62页 |
·流感病毒感染神经胶质细胞 | 第62页 |
·流感病毒空斑检测 | 第62-63页 |
·流感病毒在胶质细胞中的生长曲线 | 第63页 |
·Annexin V/ PI 双染法检测细胞凋亡 | 第63页 |
·流感病毒核蛋白的免疫荧光检测 | 第63-64页 |
·胶质细胞RNA 的提取及反转录 | 第64页 |
·小鼠胶质细胞感染流感病毒后炎症相关因子的半定量PCR 检测 | 第64-66页 |
·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第66-67页 |
·小鼠胶质细胞感染流感病毒后抗病毒因子的表达变化检测 | 第67页 |
·人胶质细胞的分离与培养 | 第67-68页 |
·人胶质细胞感染流感病毒后APOBEC 家族基因表达变化检测 | 第68-69页 |
·结果 | 第69-85页 |
·小鼠胶质细胞的分离与培养 | 第69页 |
·小胶质细胞与星形胶质细胞的纯度鉴定 | 第69-71页 |
·胶质细胞表面的流感病毒受体分布 | 第71页 |
·流感病毒感染小胶质细胞和星形胶质细胞 | 第71-73页 |
·流感病毒在小胶质细胞和星形胶质细胞中的复制动力学 | 第73-74页 |
·流感病毒感染诱导的神经胶质细胞凋亡 | 第74-75页 |
·流感病毒感染神经胶质细胞后炎症相关细胞因子基因表达变化 | 第75-78页 |
·流感病毒感染后胶质细胞IL-1β分泌上调 | 第78-79页 |
·流感病毒感染后胶质细胞IL-6 分泌上调 | 第79-80页 |
·流感病毒感染后胶质细胞TNF-α分泌上调 | 第80-81页 |
·流感病毒感染后胶质细胞抗病毒因子表达变化 | 第81-83页 |
·人原代神经胶质细胞的分离与培养 | 第83页 |
·人胶质细胞感染流感病毒后APOBEC 家族基因表达变化 | 第83-85页 |
·讨论 | 第85-88页 |
·小结 | 第88页 |
·参考文献 | 第88-93页 |
第四章 APOBEC 家族基因的克隆表达及其对流感病毒复制的影响 | 第93-118页 |
·材料与方法 | 第93-102页 |
·质粒 | 第93-94页 |
·细胞及培养基 | 第94页 |
·引物 | 第94页 |
·APOBEC 家族基因的克隆 | 第94-98页 |
·稳定表达hA3F 和hA3G 的MDCK 细胞系的构建 | 第98-99页 |
·hA3F 和hA3G 蛋白的细胞定位检测 | 第99-100页 |
·MDCK 及A549 细胞的转染 | 第100页 |
·半数组织培养感染剂量(TCID50)检测 | 第100页 |
·流感病毒在稳定表达hA3F 和hA3G 的MDCK 细胞中复制效率检测 | 第100-101页 |
·其它APOBEC 家族蛋白对流感病毒复制效率的影响 | 第101页 |
·hA3F 和hA3G 在HepG2.2.15 细胞模型上抑制HBV 复制效率的检测 | 第101-102页 |
·流感病毒基因组突变率的检测 | 第102页 |
·结果 | 第102-112页 |
·APOBEC 家族基因的克隆及表达载体的构建 | 第102-104页 |
·hA3F 和hA3G 表达细胞系的Western blotting 检测 | 第104页 |
·hA3F 和hA3G 表达细胞系中阳性表达细胞的比例 | 第104-106页 |
·hA3F 和hA3G 重组蛋白在细胞内的定位 | 第106页 |
·流感病毒在hA3F 和hA3G 表达细胞中的TCID50 滴度 | 第106-107页 |
·流感病毒在稳定表达hA3F 和hA3G 的MDCK 细胞中的空斑滴度 | 第107-108页 |
·不同感染剂量流感病毒在MDCK 细胞中各时相的复制效率 | 第108-109页 |
·流感病毒感染后细胞hA3F 和hA3G 表达水平 | 第109-110页 |
·hA3F 和hA3G 表达载体在HepG2.2.15 细胞中抑制HBV 复制 | 第110页 |
·其它APOBEC 家族蛋白对流感病毒复制的影响 | 第110-112页 |
·hA3F 和hA3G 对流感病毒基因组无显著的超突变作用 | 第112页 |
·讨论 | 第112-115页 |
·小结 | 第115页 |
·参考文献 | 第115-118页 |
附录1 流感病毒A/Shantou/169/2006(H1N1)氨基酸序列 | 第118-122页 |
附录2 APOBEC 家族成员DNA 序列 | 第122-128页 |
结论 | 第128-129页 |
论文的创新点 | 第129-130页 |
博士期间发表及待发表的论文 | 第130-131页 |
研究生简历 | 第131-132页 |
致谢 | 第132-133页 |