极端嗜热天冬氨酸激酶在大肠杆菌中克隆表达、纯化及酶学性质研究
| 中文提要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-30页 |
| 第一部分 天冬氨酸激酶 | 第12-18页 |
| ·天冬氨酸激酶的来源 | 第12页 |
| ·天冬氨酸激酶的反应机制和作用机制 | 第12-13页 |
| ·天冬氨酸激酶的结构 | 第13-14页 |
| ·天冬氨酸激酶的研究应用 | 第14-18页 |
| 第二部分 极端嗜热菌 | 第18-23页 |
| ·极端嗜热菌基本介绍 | 第18-19页 |
| ·嗜热菌对高温的抗性 | 第19-23页 |
| 第三部分 嗜热酶研究进展 | 第23-29页 |
| ·嗜热酶的耐热机制 | 第23-25页 |
| ·提高嗜热酶耐热性的方法 | 第25-28页 |
| ·展望 | 第28-29页 |
| 第四部分 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第30-39页 |
| ·实验材料和仪器 | 第30-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·极端嗜热天冬氨酸激酶基因ask 的扩增 | 第33页 |
| ·ask 基因的PCR 扩增产物的回收 | 第33-34页 |
| ·回收产物与pET 28a 载体连接 | 第34-35页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第36页 |
| ·tAK 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第36页 |
| ·tAK 粗酶液制备和热纯化 | 第36-37页 |
| ·表达产物tAK 的SDS-PAGE 分析 | 第37页 |
| ·tAK 酶活性测定 | 第37-38页 |
| ·tAK 的酶学性质 | 第38页 |
| ·tAK 粗酶液中蛋白浓度测 | 第38-39页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第39-47页 |
| ·ask 基因的克隆与重组表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·ask 的表达和热处理纯化 | 第40-41页 |
| ·tAK 活性测定 | 第41-42页 |
| ·tAK 的酶学性质 | 第42-45页 |
| ·末端产物氨基酸对tAK 反馈抑制作用 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-51页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第47-48页 |
| ·实现外源蛋白在大肠杆菌表达系统中高效表达的策略 | 第48-49页 |
| ·表达的重组酶的酶学性质 | 第49-50页 |
| ·尚待进一步研究的问题 | 第50-51页 |
| 第五章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 在校期间发表论文 | 第60-61页 |
| 英文缩略词 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 详细摘要 | 第63页 |
