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鹅副粘病毒F基因的克隆、分析及核酸探针检测方法的建立

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-14页
引言第14-31页
 1 鹅副粘病毒概述第14-16页
   ·流行病学第14-15页
   ·临床症状及病理变化第15-16页
   ·病毒的组织嗜性第16页
 2 病原学研究第16-17页
 3 分子生物学研究第17-24页
   ·融合蛋白第17-19页
   ·HN 蛋白第19-22页
   ·M 蛋白第22页
   ·NP 蛋白第22-23页
   ·P 蛋白第23页
   ·L 蛋白第23-24页
 4 鹅副粘病毒检测方法的研究第24-27页
   ·病毒的分离与鉴定第24页
   ·血凝、血凝抑制试验第24页
   ·荧光抗体技术第24-25页
   ·酶联免疫吸附试验第25页
   ·RT-PCR 技术第25-26页
   ·单克隆抗体标记技术第26页
   ·核酸探针检测技术第26-27页
 5 鹅副粘病毒病的预防与控制第27-30页
   ·活疫苗第27页
   ·灭活苗第27-28页
   ·亚单位疫苗第28页
   ·核酸疫苗第28-29页
   ·重组活载体疫苗第29-30页
 6 研究的目的与意义第30-31页
试验一 鹅副粘病毒的分离鉴定及生物学特性研究第31-37页
 1 材料与方法第32-34页
   ·材料第32页
     ·病毒与细菌第32页
     ·试验用SPF 鸡胚第32页
     ·试验动物第32页
   ·方法第32-34页
     ·病毒的分离与增值第32页
     ·血凝、血凝抑制试验第32页
     ·理化特性测定第32-33页
     ·病毒血凝特性测定第33页
     ·鸡胚平均致死亡时间(MDT)的测定第33页
     ·1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)的测定第33页
     ·6周龄雏鸡静脉接种致病指数(IVPI)的测定第33-34页
     ·动物致病性试验第34页
 2 结果第34-35页
   ·血凝试验和血凝抑制试验第34页
   ·理化特性的测定第34页
   ·血凝特性的测定第34页
   ·MDT的测定第34-35页
   ·ICPI测定结果第35页
   ·IVPI测定结果第35页
   ·动物致病性试验结果第35页
 3 讨论第35-37页
实验二 鹅副粘病毒LS-1 株F 基因的克隆及序列分析第37-52页
 1 材料与方法第38-45页
   ·材料第38-39页
     ·病毒第38页
     ·载体与受体菌第38页
     ·仪器和试剂第38页
     ·RT-PCR 引物第38-39页
     ·SPF 鸡胚第39页
     ·主要溶液的配制第39页
   ·方法第39-45页
     ·病毒的增殖与浓缩第39-40页
     ·病毒基因组RNA 的提取第40页
     ·cDNA 的合成第40页
     ·PCR 扩增第40-41页
     ·PCR 产物的克隆及序列分析第41-45页
       ·PCR 产物的回收与纯化第41-42页
       ·PCR 产物的连接第42页
       ·大肠杆菌 BL21 感受态细胞的制备第42页
       ·连接产物的转化第42-43页
       ·质粒 DNA 的提取第43页
       ·质粒DNA 的 PCR 鉴定第43-44页
       ·阳性质粒的酶切鉴定第44页
       ·重组质粒的序列测定及分析第44-45页
 2 结果第45-50页
   ·RT-PCR第45页
   ·重组质粒的酶切鉴定结果第45-46页
   ·测序结果及序列分析第46-48页
   ·同源性分析第48-49页
   ·进化树分析结果第49-50页
 3 讨论第50-52页
实验三 鹅副粘病毒地高辛标记探针检测方法的建立和应用第52-66页
 1 材料和方法第52-59页
   ·材料第52-54页
     ·仪器和试剂第52-53页
     ·试剂第53页
     ·细菌和病毒第53-54页
     ·PCR 引物第54页
   ·方法第54-59页
     ·鹅副粘病毒F 基因扩增第54-56页
     ·探针的标记第56页
     ·核酸样品处理第56页
     ·杂交检测程序第56-57页
     ·探针标记效率检测第57-58页
     ·探针敏感性检测第58页
     ·探针特异性检测第58页
     ·最佳反应时间的选择第58页
     ·探针重复性和稳定性检测第58页
     ·标记探针和 RT-PCR 对已知鹅副粘病毒核酸的检测第58页
     ·标记探针对鹅副粘病毒疑似病例的检测第58-59页
 2 结果与分析第59-64页
   ·RT-PCR 结果第59页
   ·RT-PCR 产物的克隆和序列测定第59-60页
   ·探针标记效率检测第60-61页
   ·特异性试验第61-62页
   ·敏感性实验第62页
   ·最佳杂交时间的选择第62页
   ·重复性和稳定性检测第62-63页
   ·两种检测方法对已知样品的检测第63页
   ·标记探针对鹅副粘病毒疑似病例的检测第63-64页
 3 讨论第64-66页
结论第66-67页
参考文献第67-78页
附录第78-86页
致谢第86-87页
攻读学位期间发表论文情况第87页

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