中文摘要 | 第1-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
引言 | 第14-31页 |
1 鹅副粘病毒概述 | 第14-16页 |
·流行病学 | 第14-15页 |
·临床症状及病理变化 | 第15-16页 |
·病毒的组织嗜性 | 第16页 |
2 病原学研究 | 第16-17页 |
3 分子生物学研究 | 第17-24页 |
·融合蛋白 | 第17-19页 |
·HN 蛋白 | 第19-22页 |
·M 蛋白 | 第22页 |
·NP 蛋白 | 第22-23页 |
·P 蛋白 | 第23页 |
·L 蛋白 | 第23-24页 |
4 鹅副粘病毒检测方法的研究 | 第24-27页 |
·病毒的分离与鉴定 | 第24页 |
·血凝、血凝抑制试验 | 第24页 |
·荧光抗体技术 | 第24-25页 |
·酶联免疫吸附试验 | 第25页 |
·RT-PCR 技术 | 第25-26页 |
·单克隆抗体标记技术 | 第26页 |
·核酸探针检测技术 | 第26-27页 |
5 鹅副粘病毒病的预防与控制 | 第27-30页 |
·活疫苗 | 第27页 |
·灭活苗 | 第27-28页 |
·亚单位疫苗 | 第28页 |
·核酸疫苗 | 第28-29页 |
·重组活载体疫苗 | 第29-30页 |
6 研究的目的与意义 | 第30-31页 |
试验一 鹅副粘病毒的分离鉴定及生物学特性研究 | 第31-37页 |
1 材料与方法 | 第32-34页 |
·材料 | 第32页 |
·病毒与细菌 | 第32页 |
·试验用SPF 鸡胚 | 第32页 |
·试验动物 | 第32页 |
·方法 | 第32-34页 |
·病毒的分离与增值 | 第32页 |
·血凝、血凝抑制试验 | 第32页 |
·理化特性测定 | 第32-33页 |
·病毒血凝特性测定 | 第33页 |
·鸡胚平均致死亡时间(MDT)的测定 | 第33页 |
·1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)的测定 | 第33页 |
·6周龄雏鸡静脉接种致病指数(IVPI)的测定 | 第33-34页 |
·动物致病性试验 | 第34页 |
2 结果 | 第34-35页 |
·血凝试验和血凝抑制试验 | 第34页 |
·理化特性的测定 | 第34页 |
·血凝特性的测定 | 第34页 |
·MDT的测定 | 第34-35页 |
·ICPI测定结果 | 第35页 |
·IVPI测定结果 | 第35页 |
·动物致病性试验结果 | 第35页 |
3 讨论 | 第35-37页 |
实验二 鹅副粘病毒LS-1 株F 基因的克隆及序列分析 | 第37-52页 |
1 材料与方法 | 第38-45页 |
·材料 | 第38-39页 |
·病毒 | 第38页 |
·载体与受体菌 | 第38页 |
·仪器和试剂 | 第38页 |
·RT-PCR 引物 | 第38-39页 |
·SPF 鸡胚 | 第39页 |
·主要溶液的配制 | 第39页 |
·方法 | 第39-45页 |
·病毒的增殖与浓缩 | 第39-40页 |
·病毒基因组RNA 的提取 | 第40页 |
·cDNA 的合成 | 第40页 |
·PCR 扩增 | 第40-41页 |
·PCR 产物的克隆及序列分析 | 第41-45页 |
·PCR 产物的回收与纯化 | 第41-42页 |
·PCR 产物的连接 | 第42页 |
·大肠杆菌 BL21 感受态细胞的制备 | 第42页 |
·连接产物的转化 | 第42-43页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第43页 |
·质粒DNA 的 PCR 鉴定 | 第43-44页 |
·阳性质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
·重组质粒的序列测定及分析 | 第44-45页 |
2 结果 | 第45-50页 |
·RT-PCR | 第45页 |
·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
·测序结果及序列分析 | 第46-48页 |
·同源性分析 | 第48-49页 |
·进化树分析结果 | 第49-50页 |
3 讨论 | 第50-52页 |
实验三 鹅副粘病毒地高辛标记探针检测方法的建立和应用 | 第52-66页 |
1 材料和方法 | 第52-59页 |
·材料 | 第52-54页 |
·仪器和试剂 | 第52-53页 |
·试剂 | 第53页 |
·细菌和病毒 | 第53-54页 |
·PCR 引物 | 第54页 |
·方法 | 第54-59页 |
·鹅副粘病毒F 基因扩增 | 第54-56页 |
·探针的标记 | 第56页 |
·核酸样品处理 | 第56页 |
·杂交检测程序 | 第56-57页 |
·探针标记效率检测 | 第57-58页 |
·探针敏感性检测 | 第58页 |
·探针特异性检测 | 第58页 |
·最佳反应时间的选择 | 第58页 |
·探针重复性和稳定性检测 | 第58页 |
·标记探针和 RT-PCR 对已知鹅副粘病毒核酸的检测 | 第58页 |
·标记探针对鹅副粘病毒疑似病例的检测 | 第58-59页 |
2 结果与分析 | 第59-64页 |
·RT-PCR 结果 | 第59页 |
·RT-PCR 产物的克隆和序列测定 | 第59-60页 |
·探针标记效率检测 | 第60-61页 |
·特异性试验 | 第61-62页 |
·敏感性实验 | 第62页 |
·最佳杂交时间的选择 | 第62页 |
·重复性和稳定性检测 | 第62-63页 |
·两种检测方法对已知样品的检测 | 第63页 |
·标记探针对鹅副粘病毒疑似病例的检测 | 第63-64页 |
3 讨论 | 第64-66页 |
结论 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-78页 |
附录 | 第78-86页 |
致谢 | 第86-87页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第87页 |