DNA疫苗生产工艺的研究
| 提要 | 第1-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-28页 |
| 第一部分 DNA疫苗研究现状 | 第8-10页 |
| 1. 概况 | 第8-9页 |
| 2. DNA疫苗组成 | 第9页 |
| 3. DNA疫苗免疫机制及途径 | 第9-10页 |
| 第二部分 DNA疫苗生产工艺的研究进展 | 第10-24页 |
| 1. DNA疫苗工程菌发酵培养基优化策略 | 第11-12页 |
| 2. DNA疫苗工程菌发酵参数优化的策略 | 第12-16页 |
| ·基质浓度对发酵的影响 | 第14页 |
| ·温度的影响 | 第14页 |
| ·pH值的影响 | 第14-15页 |
| ·溶氧的影响 | 第15页 |
| ·搅拌转速的影响 | 第15页 |
| ·通气量的影响 | 第15-16页 |
| ·比生长速率及代谢副产物的影响 | 第16页 |
| 3. DNA疫苗纯化的策略 | 第16-24页 |
| ·细胞裂解 | 第16-17页 |
| ·澄清和浓缩 | 第17-18页 |
| ·色谱纯化质粒的原理及应用特点 | 第18-24页 |
| 第三部分 DNA疫苗质量监控标准的建立及要求 | 第24-27页 |
| 第四部分 本论文设计方案 | 第27-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-54页 |
| 第一部分 材料、仪器和试剂 | 第28-31页 |
| 1. 材料 | 第28-30页 |
| 2. 主要仪器 | 第30页 |
| 3. 常用试剂配制 | 第30-31页 |
| 第二部分 质粒DNA生产工艺研究 | 第31-44页 |
| 1. 菌种的传代稳定性研究 | 第31-33页 |
| 2. 培养基优化试验 | 第33-36页 |
| 3. 发酵参数对菌体生长和质粒拷贝数的影响 | 第36-37页 |
| 4. 不同细菌裂解方法比较 | 第37-38页 |
| 5. 细菌大量裂解条件优化 | 第38-39页 |
| 6. 碱裂解反应器的建立 | 第39-40页 |
| 7. 裂解液澄清 | 第40-41页 |
| 8. 色谱纯化 | 第41-43页 |
| 9. 质粒DNA除菌及浓缩 | 第43-44页 |
| 第三部分 质粒DNA质量检测 | 第44-54页 |
| 1. 质粒DNA定量 | 第44页 |
| 2. 质粒D-GPEi的鉴定 | 第44页 |
| 3. 宿主DNA残余量检测 | 第44-45页 |
| 4. 内毒素检测方法 | 第45-46页 |
| 5. 杂质蛋白质检测 | 第46页 |
| 6. 无菌试验 | 第46-47页 |
| 7. 异常毒性试验 | 第47页 |
| 8. 体外表达试验 | 第47-49页 |
| 9. 免疫学试验 | 第49-54页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第54-90页 |
| 第一部分 培养基及发酵优化 | 第54-65页 |
| 1. 菌种传代稳定性结果 | 第54-56页 |
| 2. 培养基优化实验 | 第56-60页 |
| 3. 发酵参数对细菌浓度和质粒DNA拷贝数的影响 | 第60-65页 |
| 第二部分 碱裂解工艺优化 | 第65-73页 |
| 1. 细菌裂解各参数对质粒DNA提取的影响 | 第65-68页 |
| 2. 碱裂解反应器的建立及反应条件的优化 | 第68页 |
| 3. 裂解液澄清 | 第68-73页 |
| 第三部分 色谱纯化条件的优化 | 第73-84页 |
| 1. 离子交换色谱分离质粒DNA的比较 | 第73-75页 |
| 2. 分子筛层析分离质粒DNA的比较 | 第75-77页 |
| 3. 疏水层析分离质粒DNA | 第77-78页 |
| 4. 亲和层析分离超螺旋和开环质粒DNA | 第78-79页 |
| 5. 质粒DNA除菌及浓缩 | 第79-84页 |
| 第四部分 质粒DNA生产质量控制 | 第84-90页 |
| 1 质粒DNA浓度测定 | 第84页 |
| 2. D-GPEi质粒酶切鉴定 | 第84页 |
| 3. 宿主DNA残余量检测 | 第84-85页 |
| 4. 细菌内毒素含量测定 | 第85页 |
| 5. 杂蛋白残留含量测定 | 第85页 |
| 6. 无菌实验 | 第85-86页 |
| 7. 异常毒性试验结果 | 第86页 |
| 8. 抗原表达试验结果 | 第86-87页 |
| 9. 免疫学试验结果 | 第87-90页 |
| 结论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 中文摘要 | 第100-104页 |
| 英文摘要 | 第104-110页 |
| 作者简历 | 第110页 |
