摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-31页 |
1. 水稻基因组学研究现状 | 第12-13页 |
2. 水稻 T-DNA插入突变体库的构建 | 第13-20页 |
·T-DNA转移和整合的特性 | 第13-15页 |
·T-DNA转移的特性 | 第13-14页 |
·T-DNA整合的特性 | 第14-15页 |
·T-DNA插入突变的几种策略 | 第15-20页 |
·基因敲除(Gene knock-out)技术 | 第17页 |
·基因捕获(Gene trap)技术 | 第17-19页 |
·激活标签(Activation tagging) | 第19页 |
·多功能标签 | 第19-20页 |
3. 水稻 T-DNA插入突变体侧翼序列的分离 | 第20-23页 |
·热循环不对称 PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR,简称TAIL-PCR) | 第21页 |
·反向PCR(Inverse PCR) | 第21-22页 |
·质粒拯救(Plasmid rescue) | 第22页 |
·几种分离侧翼序列方法的比较 | 第22-23页 |
4. T-DNA插入突变在水稻功能基因组学研究中的应用现状 | 第23-25页 |
5. 矮化的机理及矮化重要基因的克隆 | 第25-29页 |
·水稻矮秆性状的遗传研究 | 第25-26页 |
·水稻植株矮化机制研究 | 第26-29页 |
·水稻植株矮化与植物激素的关系 | 第27-28页 |
·参与调控水稻植株高矮的GA相关基因的克隆 | 第27页 |
·参与调控水稻植株高矮的BR相关基因的克隆 | 第27-28页 |
·其它类型的植物矮化突变体 | 第28-29页 |
6. 本研究的研究目的、意义和创新之处 | 第29-31页 |
·本研究的研究目的 | 第29页 |
·本研究的意义 | 第29-30页 |
·本研究的创新之处 | 第30-31页 |
第二章 T-DNA突变体材料的筛选和侧翼序列的分离 | 第31-47页 |
1. 材料 | 第31-32页 |
·植物材料 | 第31-32页 |
·主要试剂 | 第32页 |
·主要设备 | 第32页 |
2. 方法 | 第32-37页 |
·DNA小样抽提(CTAB法) | 第32页 |
·DNA大样抽提(CTAB法) | 第32-33页 |
·转基因植株的PCR阳性检测 | 第33页 |
·转基因植株的T_1代筛选 | 第33页 |
·T-DNA侧翼序列的分离 | 第33-36页 |
·侧翼序列的共分离检测 | 第36页 |
·转基因植株的T_2代筛选 | 第36-37页 |
3. 结果 | 第37-44页 |
·转基因植株的T_1代筛选 | 第37-39页 |
·转基因植株的 PCR阳性检测 | 第39-41页 |
·T-DNA侧翼序列分离 | 第41-44页 |
·T-DNA侧翼序列的分离 | 第41页 |
·T-DNA侧翼序列的验证及利用 | 第41-44页 |
·转基因植株的T_2代筛选 | 第44页 |
4. 讨论 | 第44-47页 |
·突变体的田间筛选 | 第44-45页 |
·T-DNA侧翼序列的分离 | 第45-47页 |
第三章 SDP1基因的功能分析 | 第47-66页 |
1. 材料 | 第47-49页 |
·植物材料和细菌菌株 | 第47页 |
·质粒载体 | 第47-49页 |
·主要试剂 | 第49页 |
·主要设备 | 第49页 |
2. 方法 | 第49-54页 |
·DNA的抽提和 Southern杂交 | 第49-50页 |
·RNA的抽提与反转录 | 第50页 |
·SDP1基因的计算机分析 | 第50-51页 |
·SDP1基因的功能分析 | 第51-53页 |
·T_3代遗传稳定性分析 | 第51页 |
·拷贝数检测 | 第51页 |
·互补载体后代表型观察及基因型检测 | 第51页 |
·GUS基因在植株中的表达 | 第51-52页 |
·RT-PCR表达分析 | 第52页 |
·pSDP1::GFP融合表达载体构建及转化 | 第52-53页 |
·生理功能分析 | 第53页 |
·激素敏感性实验 | 第53页 |
·激素大田处理材料 | 第53页 |
·GA室内处理材料 | 第53页 |
·暗室处理材料 | 第53页 |
·色素含量的测定 | 第53页 |
·农艺性状分析 | 第53-54页 |
·不同时期株高的测定 | 第53-54页 |
·考种 | 第54页 |
3. 结果 | 第54-62页 |
·SDP1基因的计算机分析 | 第54页 |
·SDP1基因的功能分析 | 第54-57页 |
·T_3代遗传稳定性分析 | 第54-56页 |
·Southern杂交检测拷贝数 | 第56页 |
·互补载体后代表型观察及验证 | 第56页 |
·GUS基因在植株中的表达 | 第56-57页 |
·RT-PCR表达分析 | 第57页 |
·pSDP1::GFP融合表达载体的验证及转化 | 第57页 |
·生理功能分析 | 第57-60页 |
·激素敏感性实验 | 第57-59页 |
·激素处理大田材料 | 第57-58页 |
·GA室内处理材料 | 第58-59页 |
·暗室处理材料 | 第59页 |
·色素含量的测定 | 第59-60页 |
·农艺性状考查 | 第60-62页 |
·不同时期株高的测定 | 第60-61页 |
·考种 | 第61-62页 |
4. 讨论 | 第62-65页 |
·互补载体的构建 | 第62-63页 |
·基因的表达分析 | 第63页 |
·基因的功能分析 | 第63-65页 |
·突变可能与控制株高的基因有关 | 第63-64页 |
·突变可能与控制叶色的基因有关 | 第64页 |
·突变可能与控制抽穗期基因有关 | 第64-65页 |
·SDP1基因功能探讨小结 | 第65页 |
5. 进一步研究设想 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-76页 |
致谢 | 第76-77页 |
附录 | 第77-89页 |