| 中文摘要 | 第1-17页 |
| 英文摘要 | 第17-22页 |
| 符号说明 | 第22-24页 |
| 第一部分 绪论 | 第24-40页 |
| 1.前言 | 第24-25页 |
| 2.文献综述 | 第25-39页 |
| ·肠道细菌的分类、基因组特点及检测方法 | 第25-27页 |
| ·硬壁菌门的分类及基因组特点 | 第25-26页 |
| ·拟杆菌门的分类及基因组特点 | 第26-27页 |
| ·ANGPTL4基因概况 | 第27-30页 |
| ·ANGPTL4的结构、类型及分布 | 第27-29页 |
| ·ANGPTL4的作用 | 第29-30页 |
| ·微生物与肥胖或脂肪沉积的关系 | 第30-36页 |
| ·微生物与肥胖或体脂沉积 | 第31-32页 |
| ·肥胖与硬壁菌门、拟杆菌门及拟杆菌门/硬壁菌门比例相关 | 第32-33页 |
| ·微生物引起肥胖及机制 | 第33-36页 |
| ·微生物与ANGPTL4的关系 | 第36-38页 |
| ·应用实时荧光定量PCR技术检测拟杆菌及ANGPTL4基因表达量 | 第38-39页 |
| 3 存在问题 | 第39页 |
| 4 本研究目的、意义及内容 | 第39-40页 |
| 第二部分 试验研究 | 第40-128页 |
| 试验一 拟杆菌属-普雷沃氏菌属16SrDNATaqMan-PCR实时荧光定量PCR方法建立 | 第40-50页 |
| 1 材料与方法 | 第40-42页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第40页 |
| ·菌株与培养基 | 第40页 |
| ·细菌和回肠内容物DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·拟杆菌属—普雷沃氏菌属常规PCR引物设计及其扩增片段序列测定 | 第41页 |
| ·实时荧光定量引物与探针设计及试验条件的优化 | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR敏感性和探针特异性 | 第41-42页 |
| ·回肠内容物样品检测 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-46页 |
| ·拟杆菌属—普雷沃氏菌属常规PCR产物及测序结果 | 第42-43页 |
| ·实时荧光定量引物与探针及PCR条件条件的优化 | 第43-44页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第44页 |
| ·实时荧光定量PCR的敏感性 | 第44页 |
| ·实时荧光定量PCR探针特异性 | 第44-46页 |
| ·猪回肠内容物拟杆菌属—普雷沃氏菌属的定量 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| ·实时荧光定量PCR引物与探针 | 第46-47页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线 | 第47页 |
| ·镁离子与探针浓度优化 | 第47页 |
| ·粪便样品中菌群总DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·猪回肠内容物拟杆菌属—普雷沃氏菌属的检测 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 试验二 不同品种猪肠道微生物与体脂的关系 | 第50-69页 |
| 1 材料与方法 | 第50-53页 |
| ·试验动物 | 第50页 |
| ·试验日粮 | 第50页 |
| ·饲养管理 | 第50页 |
| ·样品采集 | 第50页 |
| ·测定指标与方法 | 第50-53页 |
| ·数据处理和统计分析 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-60页 |
| ·B.P标准曲线的制备 | 第53页 |
| ·不同品种猪肠道总细菌数、G~+、G~-、G~+/G~-及B.P数量差异 | 第53-54页 |
| ·长白和太湖猪体脂性状指标 | 第54页 |
| ·主要菌群与体脂的相关和回归分析 | 第54-60页 |
| 3 讨论 | 第60-68页 |
| ·长白和太湖猪各阶段主要菌群的差异 | 第60-66页 |
| ·两品种猪的脂肪沉积差异及可能原因 | 第66-67页 |
| ·不同月龄猪主要菌群数量与体脂间的相关性 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 试验三 猪ANGPTL4基因的克隆及其实时荧光定量TaqMan-PCR检测方法的建立 | 第69-92页 |
| 1 材料和方法 | 第69-79页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第69页 |
| ·试验动物 | 第69页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第69-71页 |
| ·ANGPTL4和β-actin的扩增片段的克隆测序 | 第71-76页 |
| ·ANGPTL4适时定量表达量 | 第76-78页 |
| ·统计分析 | 第78-79页 |
| 2 结果 | 第79-87页 |
| ·组织RNA样品的完整性与纯度检测 | 第79页 |
| ·长白和太湖猪ANGPTL4和β-actin目的片断序列的测定 | 第79-81页 |
| ·荧光定量PCR探针浓度的优化 | 第81页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第81-86页 |
| ·探针的灵敏性 | 第86-87页 |
| ·长白和太湖猪回肠ANGPTL4基因的相对表达量 | 第87页 |
| 3 讨论 | 第87-90页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第87-89页 |
| ·实时荧光定量PCR引物与探针 | 第89页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线 | 第89-90页 |
| ·探针浓度的优化 | 第90页 |
| ·长白和太湖猪回肠ANGPTL4基因的相对表达量 | 第90页 |
| 4 结论 | 第90-92页 |
| 试验四 ANGPTL4基因在猪不同组织器官中的表达差异 | 第92-100页 |
| 1 材料和方法 | 第92-95页 |
| ·试验动物 | 第92页 |
| ·试验日粮 | 第92页 |
| ·饲养管理 | 第92页 |
| ·样品采集 | 第92页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第92-93页 |
| ·RT-PCR反应 | 第93-95页 |
| ·统计分析 | 第95页 |
| 2 结果 | 第95-97页 |
| ·组织RNA样品的完整性与纯度检测 | 第95页 |
| ·常规PCR产物及回收产物电泳图 | 第95-96页 |
| ·ANGPTL4基因在两品种猪的表达差异 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| ·半定量RT-PCR技术检测ANGPTL4基因在猪不同组织的表达 | 第97页 |
| ·ANGPTL4基因在不同品种猪组织表达差异 | 第97-98页 |
| 4 结论 | 第98-100页 |
| 试验五 不同品种猪回肠菌群与ANGPTL4基因的关系 | 第100-113页 |
| 1 材料和方法 | 第100-102页 |
| ·试验动物 | 第100页 |
| ·试验日粮 | 第100页 |
| ·饲养管理 | 第100页 |
| ·样品采集 | 第100页 |
| ·ANGPTL4的适时表达量 | 第100-101页 |
| ·拟杆菌属-普雷沃氏菌属的适时表达量 | 第101页 |
| ·统计分析 | 第101-102页 |
| 2 结果 | 第102-103页 |
| ·ANGPTL4基因在长白和太湖猪不同年龄阶段回肠中的表达量差异 | 第102页 |
| ·长白和太湖猪各阶段回肠内容物中拟杆菌属-普雷沃氏菌属的定量 | 第102-103页 |
| ·回肠菌群与ANGPTL4表达量相关和回归分析 | 第103页 |
| 3 讨论 | 第103-111页 |
| ·长白和太湖猪各阶段回肠中ANGPTL4基因表达的检测 | 第103-110页 |
| ·长白和太湖猪各阶段回肠内容物中拟杆菌属-普雷沃氏菌属的定量结果 | 第110-111页 |
| ·不同月龄猪回肠菌群与ANGPTL4相关和回归分析 | 第111页 |
| 4 结论 | 第111-113页 |
| 试验六 多形拟杆菌及代谢产物对猪回肠上皮细胞ANGPTL4表达的影响 | 第113-128页 |
| 1 试验材料与方法 | 第113-115页 |
| ·试验设计 | 第113页 |
| ·多形拟杆菌的培养 | 第113页 |
| ·代谢产物的制备 | 第113-114页 |
| ·回肠上皮细胞的培养 | 第114页 |
| ·回肠上皮细胞接种培养 | 第114页 |
| ·测定指标及方法 | 第114-115页 |
| ·数据处理和统计分析 | 第115页 |
| 2 结果 | 第115-124页 |
| ·多形拟杆菌及其代谢产物处理后猪回肠上皮细胞的观察 | 第115-117页 |
| ·多形拟杆菌及代谢产物对猪回肠上皮细胞MTT OD的影响 | 第117页 |
| ·多形拟杆菌及其代谢产物对ANGPTL4基因表达的影响 | 第117-124页 |
| 3 讨论 | 第124-127页 |
| ·多形拟杆菌对ANGPTL4基因表达的影响 | 第124-126页 |
| ·多形拟杆菌代谢产物对ANGPTL4基因表达的影响 | 第126-127页 |
| 4 结论 | 第127-128页 |
| 第三部分 总结 | 第128-134页 |
| 1 全文总体讨论与结论 | 第128-132页 |
| ·TagMan探针实时荧光定量PCR检测拟杆菌属—普雷沃氏菌属及猪ANGPTL4基因方法建立 | 第128-130页 |
| ·微生物与体脂的关系 | 第130-131页 |
| ·主要菌群与ANGPTL4的关系 | 第131-132页 |
| ·全文总体结论 | 第132页 |
| 2 本研究的创新点 | 第132页 |
| 3 有待进一步研究的问题 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 博士期间发表的文章 | 第143页 |
