里氏木霉RUT-C30甘露聚糖酶基因man1在毕赤酵母中的高效表达
| 第一章 文献综述 | 第1-25页 |
| 1 甘露聚糖酶的研究进展 | 第11-19页 |
| ·甘露聚糖酶作用方式及自然界的来源 | 第11-13页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分离纯化和活性测定 | 第13页 |
| ·β-甘露聚糖酶研究的历史和菌种选育 | 第13-14页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因工程的研究进展 | 第14-16页 |
| ·甘露聚糖酶的应用 | 第16-19页 |
| 2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第19-22页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第20页 |
| ·蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第20-21页 |
| ·蛋白在毕赤酵母中的优化表达 | 第21-22页 |
| 3 研究内容和技术路线 | 第22-23页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 实验 | 第25-51页 |
| 1 材料 | 第25-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·工具酶 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·培养基和部分溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-41页 |
| ·甘露聚糖酶基因的克隆 | 第28-31页 |
| ·DNA片段与T载体的连接 | 第31页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞制备及转化方法 | 第31页 |
| ·筛选重组子 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第32-33页 |
| ·重组载体 pPIC9K-man1的构建 | 第33-34页 |
| ·PEG法转化毕赤酵母 | 第34-36页 |
| ·重组酵母的验证 | 第36页 |
| ·表达产物的检测 | 第36-37页 |
| ·重组酵母的高细胞密度发酵 | 第37-38页 |
| ·重组菌的稳定性检测 | 第38页 |
| ·表达甘露聚糖酶的酶学性质研究 | 第38-39页 |
| ·表达的甘露聚糖酶蛋白浓度测定 | 第39页 |
| ·酶解产物的离子色谱(IC)分析 | 第39-41页 |
| 3 结果 | 第41-51页 |
| ·里氏木霉man1基因全编码序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·重组表达载体的构建和验证 | 第42-43页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选和鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组酵母在5L发酵罐中的细胞高密度发酵 | 第45-47页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶的酶学性质 | 第47-49页 |
| ·重组甘露聚糖酶降解终产物分析 | 第49-51页 |
| 第三章 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62-64页 |
