| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第14-32页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 β-葡萄糖苷酶的来源 | 第14页 |
| 2 β-葡萄糖苷酶活性测定 | 第14-15页 |
| 3 β-葡萄糖苷酶的分离纯化及理化性质 | 第15-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第15-17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶分子大小及组成 | 第17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶最适pH及pI | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶最适温度及热稳定性 | 第18页 |
| 4 β-葡萄糖苷酶的基因克隆及表达 | 第18-21页 |
| 5 β-葡萄糖苷酶催化反应机制 | 第21-26页 |
| 6 β-葡萄糖苷酶的结构和底物专一性 | 第26-29页 |
| 7 β-葡萄糖苷酶的应用及前景展望 | 第29-32页 |
| ·水解纤维素 | 第29-30页 |
| ·生产低聚龙胆糖 | 第30页 |
| ·作为风味酶 | 第30-31页 |
| ·其它应用 | 第31-32页 |
| 第二章 嗜热毛壳菌热稳定性β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质研究 | 第32-54页 |
| 引言 | 第32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-42页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·菌株 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·固体PDA培养基 | 第33页 |
| ·液体培养基 | 第33页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第33-34页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-42页 |
| ·菌丝体的培养 | 第34页 |
| ·酶活力测定 | 第34页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第34-36页 |
| ·粗酶液的制备 | 第34页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第34-35页 |
| ·Tris-HCl缓冲液回溶 | 第35页 |
| ·DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析 | 第35页 |
| ·Phenyl-Sepharose疏水柱层析 | 第35页 |
| ·Sephacryl S-100凝胶过滤层析 | 第35-36页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第36-37页 |
| ·考马斯亮蓝G-250试剂的配制 | 第36页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第36-37页 |
| ·样品蛋白质浓度的测定 | 第37页 |
| ·纯度鉴定 | 第37-40页 |
| ·电泳操作步骤 | 第37-38页 |
| ·溶液的配制 | 第38-40页 |
| ·蛋白质分子量的测定 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE测定蛋白质(亚基)分子量 | 第40页 |
| ·凝胶过滤层析测定蛋白质分子量 | 第40-41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶性质的研究 | 第41-42页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的反应最适温度 | 第41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的反应最适pH值 | 第41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第41-42页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的pH值稳定性 | 第42页 |
| ·不同金属离子对β-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-50页 |
| ·嗜热毛壳菌(C.thermophilum)β-葡萄糖苷酶的分离纯化及鉴定 | 第42-45页 |
| ·DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析 | 第42-43页 |
| ·Phenyl-Sepharose疏水柱层析 | 第43-44页 |
| ·Sephacryl S-100凝胶过滤层析 | 第44-45页 |
| ·β-葡萄糖苷酶纯化过程总表 | 第45页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的一般性质 | 第45-50页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分子量 | 第45-46页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的最适反应温度 | 第46-47页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的最适反应pH值 | 第47-48页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第48页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的pH值稳定性 | 第48-49页 |
| ·不同金属离子对β-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| ·关于研究结果 | 第50-51页 |
| ·关于研究方法 | 第51-52页 |
| ·今后还应开展的工作 | 第52页 |
| 4 结论 | 第52-54页 |
| 第三章 嗜热毛壳菌热稳定性β-葡萄糖苷酶基因片段的cDNA克隆及其序列分析 | 第54-79页 |
| 引言 | 第54页 |
| 1 材料与方法 | 第54-65页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·供试菌株 | 第54页 |
| ·菌株与质粒 | 第54-55页 |
| ·酶和生化试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55-56页 |
| ·PCR引物 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-65页 |
| ·总RNA的提取(Trizol法) | 第56-57页 |
| ·紫外检测RNA产率和纯度 | 第57页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第57-58页 |
| ·目的基因cDNA中间片段的分离 | 第58-65页 |
| ·扩增目的基因cDNA中间片段所用引物的设计 | 第58页 |
| ·目的基因cDNA中间片段的扩增 | 第58-61页 |
| ·PCR产物回收 | 第61页 |
| ·载体连接 | 第61-62页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第62-64页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第64-65页 |
| ·序列测定 | 第65页 |
| ·目的基因3’末端的分离(3’-RACE) | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-77页 |
| ·C.thermophilum总RNA的提取 | 第66页 |
| ·C.thermophilum β-葡萄糖苷酶基因中间片段的分离 | 第66-69页 |
| ·C.thermophilum β-葡萄糖苷酶基因3’-末端cDNA的分离 | 第69-70页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因片段bgl的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第70-77页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因片段bgl的核苷酸序列分析 | 第73-74页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因片段bgl的氨基酸序列分析 | 第74-77页 |
| 3 结论与讨论 | 第77-79页 |
| ·关于研究结果 | 第77-78页 |
| ·关于研究方法 | 第78-79页 |
| 第四章 结论与建议 | 第79-81页 |
| 1 结论 | 第79页 |
| 2 建议 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第94页 |
