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棉花GA 20-氧化酶基因的克隆和功能分析

中文摘要第1-14页
Abstract第14-19页
第一章 文献综述第19-45页
   ·棉花纤维发育的分子生物学研究进展第19-32页
     ·棉花概述第19-20页
       ·棉花的植物学分类第19页
       ·棉花纤维的发育过程第19-20页
       ·棉花纤维及其分子生物学研究的意义第20页
     ·纤维发育相关基因的克隆和功能分析第20-25页
       ·棉花纤维的基因表达分析第21-22页
       ·棉花纤维特异或优势表达基因的克隆第22-24页
       ·棉花纤维特异或优势表达基因的功能研究第24-25页
     ·棉花纤维发育的分子生理学研究第25-32页
       ·MYB基因与棉花纤维的分化起始第25-27页
       ·棉花纤维伸长的分子机理第27-29页
       ·棉花纤维次生壁合成的启动第29页
       ·棉花纤维的纤维素合成第29-32页
   ·植物激素在棉花纤维发育中的作用第32-45页
     ·赤霉素的分子生物学研究进展第33-44页
       ·植物赤霉素的代谢第34-39页
       ·赤霉素的信号传导第39-44页
     ·生长素生物合成酶基因与棉花纤维发育第44-45页
第二章 引言第45-48页
   ·论文的立论依据第45-47页
   ·论文的技术路线第47-48页
第三章 棉花GA 20-氧化酶基因的克隆及特征分析第48-83页
   ·材料第48-50页
     ·植物材料第48页
     ·菌株和载体第48页
     ·主要试剂第48-49页
     ·主要仪器设备第49页
     ·主要试剂和缓冲液配方第49-50页
   ·方法第50-56页
     ·RNA的提取第50-51页
     ·DNA的提取第51页
     ·EST序列的筛选和扩增第51页
     ·相邻序列的YADE扩增第51-53页
     ·cDNA序列的3′-RACE扩增第53-54页
     ·基因组序列的扩增第54页
     ·扩增产物的回收、克隆和序列测定第54页
     ·序列分析第54-55页
     ·RT-PCR分析第55页
     ·Northern分析第55-56页
     ·Southern分析第56页
   ·结果与分析第56-79页
     ·EST序列的筛选和扩增第56-57页
     ·g20EST相邻上游序列的YADE扩增第57-60页
     ·棉花GA 20-氧化酶cDNA基因的RACE扩增第60-62页
     ·GhGA20ox2基因的基因组序列的扩增第62-63页
     ·GhGA20ox1基因的基因组序列的扩增第63-70页
       ·GhGA20ox1基因5′-上游序列的YADE扩增第63-66页
       ·GhGA20ox1基因3′-下游序列的YADE扩增第66-70页
     ·GhGA20ox1和GhGA20ox2的基因组序列的克隆第70页
     ·棉花GA 20-氧化酶的氨基酸序列分析第70-71页
     ·棉花GA 20-氧化酶的同源性分析第71-75页
       ·棉花GA 20-氧化酶的同源蛋白查询第71-73页
       ·棉花GA 20-氧化酶及其同源蛋白的进化树分析第73页
       ·棉花GA 20-氧化酶及其同源蛋白的序列多重比较第73-75页
     ·棉花GA 20-氧化酶基因的基因组结构分析第75-76页
     ·棉花GA 20-氧化酶基因的表达分析第76-79页
   ·讨论第79-81页
     ·YADE方法的原理与应用第79-80页
     ·基因表达分析的方法第80-81页
     ·棉花GA 20-氧化酶基因家族第81页
   ·小结第81-83页
第四章 棉花GA 20-氧化基因的启动子克隆及表达特性分析第83-100页
   ·材料第83-85页
     ·植物材料第83页
     ·菌株和载体第83页
     ·主要试剂第83页
     ·主要缓冲液和培养基配方第83-85页
   ·方法第85-88页
     ·棉花GA 20-氧化酶基因的启动子克隆和序列分析第85页
     ·启动子表达载体构建第85页
     ·根癌农杆菌菌株LBA4404感受态的制备及DNA转化第85-86页
     ·质粒DNA的提取第86页
     ·烟草遗传转化第86-87页
     ·棉花遗传转化第87页
     ·转化烟草的PCR鉴定第87-88页
     ·转化植株的GUS表达特性分析第88页
   ·结果与分析第88-98页
     ·GhGA20ox1基因的启动子克隆第88-89页
     ·GhGA20ox2基因的启动子克隆第89-91页
     ·pGhGA20ox1和pGhGA20ox2的启动子序列分析第91-92页
     ·启动子表达特性分析载体构建第92-95页
       ·pGhGA20ox1的表达特性分析载体的构建第92页
       ·pGhGA20ox2的表达特性分析载体的构建第92-95页
     ·pGhGA20ox2在植物中的表达特性分析第95-98页
       ·pGhGA20ox2在烟草中的表达特性第95-97页
       ·pGhGA20ox2在棉花中的表达特性第97-98页
   ·讨论第98-99页
   ·小结第99-100页
第五章 棉花GA 20-氧化酶基因在烟草中的超量表达第100-114页
   ·材料第100-101页
     ·植物材料第100页
     ·菌株和载体第100页
     ·主要试剂第100页
     ·主要缓冲液和培养基配方第100-101页
     ·主要仪器设备第101页
   ·方法第101-103页
     ·超量表达载体的构建第101页
     ·烟草遗传转化及转化植株的鉴定第101页
     ·转基因表达分析第101-102页
     ·转基因烟草的性状变异分析第102页
     ·赤霉素含量的ELISA测定第102-103页
       ·激素的提取第102页
       ·样品测定第102-103页
       ·结果计算与分析第103页
   ·结果与分析第103-112页
     ·载体构建第103-105页
       ·GhGA20ox1超量表达载体的构建第103-105页
       ·GhGA20ox2超量表达载体的构建第105页
     ·GhGA20ox1基因在本明烟中的超量表达第105-110页
       ·本明烟的遗传转化第105-107页
       ·超量表达GhGA20ox1基因的本明烟的性状变化第107-109页
       ·超量表达GhGA20ox1基因对本明烟GA合成的影响第109-110页
     ·GhGA20ox1和GhGA20ox2在普通烟草中的超量表达第110-112页
   ·讨论第112-113页
   ·小结第113-114页
第六章 GhGA20ox1基因的棉花转基因功能分析第114-134页
   ·材料第114-115页
     ·植物材料第114页
     ·菌株和载体第114页
     ·主要试剂第114页
     ·主要缓冲液配方第114-115页
     ·主要仪器设备第115页
   ·方法第115-117页
     ·反义抑制载体的构建第115页
     ·棉花遗传转化第115页
     ·表达分析第115-116页
     ·性状分析第116页
     ·显微观察第116-117页
       ·材料的固定、脱水和包埋第116-117页
       ·切片、染色和观察第117页
     ·扫描电镜观察第117页
   ·结果与分析第117-130页
     ·反义抑制载体构建第117-118页
     ·棉花遗传转化第118-120页
       ·转基因棉花的获得第118-119页
       ·GA 20-氧化酶基因在转基因棉花叶片中的表达第119-120页
     ·GhGA20ox1基因的超量表达和反义抑制对棉花生长的影响第120-122页
     ·GhGA20ox1基因的超量表达和反义抑制对棉花花发育的影响第122-125页
       ·转基因棉花的花形态和花发育时间变化第122-125页
       ·转基因棉花的花药发育进程第125页
     ·GhGA20ox1基因的超量表达和反义抑制对棉花果实和种子发育的影响第125-126页
     ·GhGA20ox1基因的超量表达和反义抑制对棉花纤维的影响第126-130页
       ·转基因棉花纤维性状的变化第126-128页
       ·转基因棉花的纤维起始和早期伸长第128-130页
   ·讨论第130-133页
     ·GhGA20ox1的超量表达和反义抑制对棉花GA合成的影响第130-131页
     ·GA在棉花发育中的作用第131-133页
       ·GA对棉花开花结铃的影响第131-132页
       ·GA对棉花花粉发育的影响第132页
       ·GA对棉花纤维发育的影响第132-133页
   ·小结第133-134页
第七章 结论第134-136页
   ·主要结论第134-135页
     ·棉花GA20-氧化酶基因GhGA20ox1的克隆和功能分析第134页
     ·棉花GA20-氧化酶同源基因GhGA20ox2的克隆和功能分析第134页
     ·GA对棉花发育的影响第134-135页
     ·启动子的克隆和功能分析第135页
   ·论文的创新第135-136页
     ·基因和启动子克隆第135页
     ·棉花GA的内源调控第135-136页
参考文献第136-153页
致谢第153-154页
附录1 缩略词表第154-155页
附录2 学习期间在GenBank上登录的基因序列第155-156页
附录3 学习期间主持、参加的主要项目和发表的文章第156-158页
 1.主持和参加的主要项目第156页
 2.攻读博士学位期间发表论文情况第156-158页
 3.攻读博士学位期间专利申请情况第158页

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