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褐飞虱对水稻品种抗性的分子反应和相关cDNA的克隆

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第一章 文献综述第13-36页
 1 褐飞虱的生物学特性及其对水稻的危害第13-15页
   ·褐飞虱的生物学特性第13页
   ·褐飞虱的取食特点第13-14页
   ·褐飞虱对水稻的危害第14-15页
 2 植物对昆虫的防御机制第15-25页
   ·直接防御作用第16-22页
   ·间接防御作用第22-24页
   ·耐受性第24-25页
 3 昆虫对宿主植物的适应及其防卫策略第25-28页
   ·细胞色素P450单加氧酶在昆虫取食植物中的重要作用第26-27页
   ·羧酸酯酶在昆虫取食植物中的重要作用第27-28页
   ·谷胱苷肽转移酶在昆虫取食植物中的重要作用第28页
 4 基于mRNA水平上的基因表达研究方法第28-35页
   ·mRNA差异显示技术第29-30页
   ·抑制消减杂交第30-31页
   ·基因表达系列分析第31-32页
   ·cDNA-AFLP技术第32-34页
   ·cDNA微阵列技术第34-35页
 5 本研究的目的和意义第35-36页
第二章 从取食三种不同抗性水稻的褐飞虱中克隆差异表达的基因第36-58页
   ·引言第36-37页
   ·材料和方法第37-46页
     ·材料第37页
     ·褐飞虱总RNA的提取第37-38页
     ·用紫外分光光度计测定RNA浓度及纯度第38页
     ·变性琼脂糖胶电泳检测总RNA的质量第38页
     ·mRNA的提取第38-39页
     ·cDNA-AFLP实验第39-43页
     ·利用点杂交验证差异表达的基因第43-45页
     ·Northern杂交第45-46页
   ·结果与分析第46-55页
     ·RNA的提取及电泳第46页
     ·mRNA的提取和cDNA的合成第46-47页
     ·cDNA-AFLP中的预扩增和选择扩增第47页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染展示第47-48页
     ·差异DNA条带的克隆及测序第48-49页
     ·测序结果分析及点杂交验证第49-54页
     ·Northern杂交验证第54-55页
   ·讨论第55-58页
第三章 褐飞虱解毒及毒物耐受性相关基因cDNA片段的克隆及其表达谱分析第58-71页
   ·引言第58-59页
   ·材料和方法第59-64页
     ·材料第59页
     ·褐飞虱总RNA的提取及检测第59页
     ·简并性引物设计及合成第59-60页
     ·解毒和耐受性相关基因cDNA片段的扩增第60-63页
     ·cDNA片段的回收、连接转化和测序第63页
     ·Northern杂交和RT-PCR验证第63-64页
   ·结果与分析第64-68页
     ·褐飞虱中解毒和耐受性相关基因的cDNA片段的克隆第64-65页
     ·测序结果及分析第65-67页
     ·Northern杂交和RT-PCR检测基因的表达第67-68页
   ·讨论第68-71页
第四章 解毒和毒物耐受性相关基因全长cDNA的克隆和序列分析第71-107页
   ·引言第71-72页
   ·材料和方法第72-77页
     ·RACE引物的设计及合成第72-73页
     ·褐飞虱总RNA的提取及检测第73页
     ·SMART RACE反应第73-74页
     ·快速扩增cDNA末端(RACE)第74-75页
     ·RACE DNA片段的连接转化及测序第75页
     ·cDNA全长序列分析第75-76页
     ·Sorthern杂交检测ACE基因的拷贝数第76-77页
   ·结果与分析第77-104页
     ·乙酰胆碱酯酶全长cDNA的克隆及序列分析第77-84页
     ·细胞色素P450 CYP6AX1和CYP6AY1全长cDNA的克隆及序列分析第84-89页
     ·nemo激酶全长cDNA的克隆及序列分析第89-95页
     ·NQO全长cDNA的克隆及序列分析第95-100页
     ·胰蛋白酶全长cDNA的克隆及序列分析第100-104页
   ·讨论第104-107页
第五章 取食不同抗性水稻的褐飞虱中肠细胞及组织结构变化第107-115页
   ·引言第107-108页
   ·材料和方法第108-109页
     ·材料和试剂盒第108页
     ·石蜡切片第108页
     ·TUNEL反应及检测第108-109页
     ·DAPI染色反应及观察第109页
   ·结果与分析第109-112页
     ·TUNEL检测第109-111页
     ·DAPI检测第111-112页
   ·讨论第112-115页
总结与展望第115-118页
参考文献第118-134页
附录Ⅰ 常用试剂配方第134-136页
附录Ⅱ 在读期间发表及待发表的论文第136-137页
致谢第137页

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