脱水素基因转化的矮牵牛对干旱胁迫的反应
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-37页 |
| ·研究的目的和意义 | 第10页 |
| ·植物耐旱相关基因工程进展 | 第10-25页 |
| ·干旱胁迫对植物的伤害 | 第11-12页 |
| ·植物的耐水分胁迫机理 | 第12-13页 |
| ·植物在干旱胁迫诱导表达的基因及其功能性蛋白 | 第13-18页 |
| ·植物干旱胁迫应答基因的表达调控 | 第18-20页 |
| ·植物在干旱胁迫信号传导途径中表达的基因 | 第20-21页 |
| ·植物对干旱胁迫应答的信号传导途径 | 第21-23页 |
| ·植物抗旱基因工程的研究 | 第23-25页 |
| ·原核蛋白表达 | 第25-30页 |
| ·蛋白质在大肠杆菌中表达的策略 | 第26页 |
| ·外源基因的表达 | 第26-30页 |
| ·观赏植物育种的研究进展 | 第30-37页 |
| ·我国园林花卉业发展现状 | 第30页 |
| ·花卉传统育种的现状 | 第30-32页 |
| ·与园林植物相关的基因克隆与转化的研究进展 | 第32-34页 |
| ·现代生物技术在花卉育种中的应用 | 第34-35页 |
| ·生物技术在花卉育种应用中存在的问题及展望 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-54页 |
| ·实验材料 | 第37-41页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·菌种和质粒 | 第37页 |
| ·分子生物学及生化试剂 | 第37页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·矮牵牛再生体系的调整及选择压力的筛选 | 第41页 |
| ·苣苔脱水素DBDN基因的克隆 | 第41-44页 |
| ·苣苔脱水素BDN1基因的克隆 | 第44-46页 |
| ·脱水素基因表达载体的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| ·BDN1基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| ·BDN1蛋白的分离与纯化 | 第48页 |
| ·抗体血清的制备 | 第48页 |
| ·抗血清效价的Elisa测定 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导矮牵牛的遗传转化 | 第49-50页 |
| ·矮牵牛再生植株的鉴定 | 第50-54页 |
| 3 实验结果 | 第54-68页 |
| ·矮牵牛再生体系及选择压力的调整 | 第54-55页 |
| ·矮牵牛诱导愈伤分化培养基的确定 | 第54页 |
| ·选择压力的确定 | 第54-55页 |
| ·苣苔脱水素DBDN基因的克隆 | 第55-57页 |
| ·苣苔脱水素BDN1基因的克隆 | 第57-59页 |
| ·TRizol法提取苣苔总RNA | 第57页 |
| ·BDN1基因片断的扩增 | 第57-59页 |
| ·脱水素基因表达载体的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·DBDN植物双元表达载体的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·BDN1原核表达载体的构建与鉴定 | 第60页 |
| ·BDN1基因在大肠杆菌中的表达 | 第60-61页 |
| ·BDN1蛋白的分离与纯化 | 第61-62页 |
| ·抗血清效价的ELISA检测 | 第62页 |
| ·矮牵牛叶盘法转化及再生 | 第62-63页 |
| ·矮牵牛再生植株的鉴定 | 第63-68页 |
| ·转基因矮牵牛再生植株的PCR鉴定 | 第63页 |
| ·转基因矮牵牛再生植株的Southern鉴定 | 第63-64页 |
| ·转基因矮牵牛再生植株的Northern鉴定 | 第64-65页 |
| ·转基因矮牵牛叶片保水力的测定 | 第65-66页 |
| ·转基因矮牵牛低温电导率的测定 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| ·植物材料培养中存在的问题 | 第68页 |
| ·载体构建中存在的问题 | 第68-69页 |
| ·PCR中存在的问题 | 第69页 |
| ·核酸提取中应注意的问题 | 第69页 |
| ·RNA提取中应注意的问题 | 第69页 |
| ·DNA提取中应注意的问题 | 第69页 |
| ·脱水素基因在大肠杆菌中的表达 | 第69-70页 |
| ·抗血清效价的ELISA检测 | 第70-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
