| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 论文 | 第14-75页 |
| 第一章 盐生杜氏藻SMART质粒cDNA文库构建 | 第14-22页 |
| 1 材料与方法 | 第14-17页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·藻种 | 第14页 |
| ·菌种 | 第14页 |
| ·酶制剂 | 第14页 |
| ·试剂盒 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-17页 |
| ·杜氏藻的培养 | 第14页 |
| ·杜氏藻总RNA分离 | 第14-15页 |
| ·LD-PCR法合成SMART~(TM) cDNA | 第15-16页 |
| ·cDNA纯化以及分段化 | 第16页 |
| ·原始文库的形成 | 第16-17页 |
| ·文库滴度测定 | 第17页 |
| ·文库质量鉴定初步鉴定 | 第17页 |
| 2 实验结论 | 第17-20页 |
| ·总RNA提取 | 第17-18页 |
| ·cDNA的检测与收集 | 第18-19页 |
| ·文库的鉴定 | 第19-20页 |
| 3 讨论 | 第20-22页 |
| ·总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·文库构建 | 第21-22页 |
| 第二章 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因克隆 | 第22-37页 |
| 1 材料与方法 | 第22-28页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·载体 | 第22页 |
| ·酶制剂 | 第22-23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·EST的获得 | 第23页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因EST引物设计 | 第23页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因EST扩增 | 第23-24页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因cDNA3’端序列酶切分析 | 第24-25页 |
| ·克隆子pGPDH-3酶切片段亚克隆 | 第25-26页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因cDNA 5’RACE引物设计 | 第26页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因cDNA 5’RACE扩增5’端未知序列 | 第26-27页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因全长cDNA序列拼接 | 第27页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因ORF的验证 | 第27-28页 |
| 2 实验结论 | 第28-33页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因EST验证 | 第28-29页 |
| ·pGPDH-3克隆子亚克隆及分析 | 第29-30页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因cDNA 5’RACE | 第30-31页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因全长cDNA拼接以及编码框验证 | 第31-33页 |
| 3 讨论 | 第33-37页 |
| ·通过EST进行基因克隆的策略 | 第33-35页 |
| ·应用快速扩增cDNA末端(Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE)方法获得3-磷酸甘油脱氢酶基因全长基因 | 第35-37页 |
| 第三章 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因鉴定 | 第37-43页 |
| 1 材料与方法 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·藻种 | 第37页 |
| ·酶制剂 | 第37页 |
| ·试剂盒 | 第37页 |
| ·溶液 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·杜氏藻的培养 | 第37页 |
| ·杜氏藻总DNA提取 | 第37-38页 |
| ·杜氏藻总DNA限制内切酶酶切 | 第38页 |
| ·PCR法合成3-磷酸甘油脱氢酶基因EST探针 | 第38-39页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因EST探针标记 | 第39页 |
| ·酶切藻总DNA的southern印迹 | 第39页 |
| ·杂交及显色反应 | 第39页 |
| 2 实验结论 | 第39-40页 |
| ·杜氏藻总DNA制备及限制内切酶酶切 | 第39-40页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因EST探针制备 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-43页 |
| ·杜氏藻总DNA制备 | 第40-41页 |
| ·杜氏藻总DNA酶切 | 第41-42页 |
| ·Southern杂交 | 第42-43页 |
| 第四章 3-磷酸甘油脱氢酶基因生物信息学分析预测 | 第43-67页 |
| 1 分析方法 | 第43-44页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第43页 |
| ·核酸GC含量分布 | 第43页 |
| ·起始ATG的预测 | 第43页 |
| ·加A信号位点预测 | 第43页 |
| ·相似性搜索 | 第43页 |
| ·多重序列比对 | 第43页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第43-44页 |
| ·基于一级结构的蛋白质性质 | 第43页 |
| ·蛋白质序列亲疏水性分析 | 第43页 |
| ·数据库搜索 | 第43-44页 |
| ·功能结构域的确定 | 第44页 |
| ·二级结构预测 | 第44页 |
| ·三级结构预测 | 第44页 |
| ·蛋白质家族分析 | 第44页 |
| ·系统发育分析 | 第44页 |
| 2 分析结果 | 第44-61页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第44-47页 |
| ·核酸GC含量分布 | 第44-45页 |
| ·起始ATG的预测 | 第45页 |
| ·加A信号位点预测 | 第45-46页 |
| ·相似性搜索 | 第46-47页 |
| ·多重序列比对 | 第47页 |
| ·蛋白质序列分析以及结构预测 | 第47-61页 |
| ·基于一级结构的蛋白质性质 | 第47页 |
| ·蛋白质序列亲疏水性分析 | 第47-48页 |
| ·数据库搜索 | 第48-50页 |
| ·功能结构域的确定 | 第50-51页 |
| ·二级结构预测 | 第51-53页 |
| ·三级结构预测 | 第53-55页 |
| ·蛋白质家族分析 | 第55-58页 |
| ·系统发育分析 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-67页 |
| ·对盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶生物信息学分析策略 | 第61-62页 |
| ·盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶结构及功能预测 | 第62-66页 |
| ·NAD~+结合域结构确定 | 第63-64页 |
| ·催化结构域确定 | 第64-66页 |
| ·磷酸化酶样结构域的预测 | 第66-67页 |
| 第五章 3-磷酸甘油脱氢酶基因结构的初步分析 | 第67-75页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·藻种 | 第67页 |
| ·菌种 | 第67页 |
| ·载体 | 第67页 |
| ·试剂盒 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-69页 |
| ·杜氏藻的培养 | 第67页 |
| ·杜氏藻总DNA提取 | 第67页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因扩增的引物设计 | 第67-68页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因的基因组扩增 | 第68页 |
| ·序列分析 | 第68-69页 |
| 2 实验结论 | 第69-70页 |
| ·杜氏藻总DNA制备 | 第69页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因扩增的引物设计 | 第69-70页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因的基因组扩增结果 | 第70页 |
| ·序列分析 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-75页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因的基因组扩增 | 第70-73页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因结构的初步分析 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 声名 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| 综述 盐生杜氏藻盐胁迫下的抗逆反应及其功能基因组学展望 | 第80-115页 |
| 一、 盐生杜氏藻的盐胁迫下系统反应 | 第81-97页 |
| 1 盐胁迫下细胞形态结构变化 | 第81-82页 |
| 2 盐胁迫下细胞离子平衡 | 第82-88页 |
| 1 ) Na~+的跨膜转运 | 第83-86页 |
| 2 ) K~+的跨膜转运 | 第86-87页 |
| 3 ) 细胞质膜H~+-ATPase | 第87-88页 |
| 3 盐胁迫下的生长代谢 | 第88-94页 |
| 1 ) 甘油代谢 | 第89-90页 |
| 2 ) 类胡萝卜素的积累 | 第90-91页 |
| 3 ) 植物激素诱导合成 | 第91页 |
| 4 ) 脂肪代谢 | 第91-92页 |
| 5 ) 对光合作用的影响 | 第92-93页 |
| 6 ) 抗氧化还原系统 | 第93页 |
| 7 ) 离子运输 | 第93-94页 |
| 4 盐胁迫下的信号机制 | 第94-95页 |
| 5 盐胁迫下的基因表达以及蛋白质合成 | 第95-97页 |
| 二、 功能基因组学研究--一个崭新的研究阶段 | 第97-104页 |
| 1 研究盐胁迫下基因组以及转录物组的方法 | 第97-101页 |
| ·基于序列表达标签(Expressed Sequence Tags，EST)基因发现 | 第97-99页 |
| ·盐胁迫下的高通量基因表达差异分析 | 第99-101页 |
| 2 盐胁迫基因的功能研究 | 第101-103页 |
| ·应用生物信息学鉴定基因功能 | 第101-102页 |
| ·正向遗传学与反求遗传学(Forward and Reverse Genetics)研究 | 第102-103页 |
| 3 盐胁迫下蛋白质组研究 | 第103-104页 |
| 三、 展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-115页 |
