| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的病原学特性及研究进展 | 第12-13页 |
| ·PRRSV 的形态学特性 | 第12页 |
| ·PRRSV 的培养特性 | 第12-13页 |
| ·PRRSV 的理化特性 | 第13页 |
| ·PRRSV 基因组结构及主要编码的蛋白 | 第13-15页 |
| ·PRRSV 的基因组结构 | 第13页 |
| ·主要编码的蛋白 | 第13-15页 |
| ·PRRSV 的基因组遗传与变异 | 第15-16页 |
| ·PRRS 流行病学、临诊症状和发病机理 | 第16-17页 |
| ·PRRS 流行病学 | 第16页 |
| ·临诊症状及病理变化 | 第16-17页 |
| ·主要发病机理 | 第17页 |
| ·PRRS 诊断方法研究进展 | 第17-19页 |
| ·反转录PCR（RT-PCR） | 第17-18页 |
| ·免疫过氧化物酶单层试验（IPMA） | 第18页 |
| ·病毒的分离与鉴定 | 第18页 |
| ·间接荧光抗体试验（IFA） | 第18页 |
| ·血清中和试验（SN） | 第18页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第18-19页 |
| ·PRRS 的防治 | 第19页 |
| ·本课题研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 PRRSV GP5 基因的亚克隆及原核表达 | 第20-41页 |
| ·材料 | 第20-25页 |
| ·细胞、抗体和毒株 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·实验动物及阳性血清 | 第20页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第20页 |
| ·RNA 提取用试剂 | 第20-21页 |
| ·细胞培养用液 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用液 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳用溶液 | 第22页 |
| ·诱导表达用溶液 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 电泳用溶液 | 第22-23页 |
| ·包涵体纯化相关试剂 | 第23-24页 |
| ·Western-blotting 用溶液 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-34页 |
| ·PCR 引物设计与合成 | 第25页 |
| ·GP5 基因的克隆与鉴定 | 第25-28页 |
| ·dGP5 目的基因表达载体的构建与鉴定 | 第28-31页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE 鉴定及其蛋白浓度的测定 | 第32页 |
| ·重组蛋白的Western-blotting 分析 | 第32页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第32-34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·PRRSV GP5 基因的扩增 | 第34页 |
| ·重组质粒pMD-GP5 的鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·原核表达质粒pGEX-6p-dGP5 的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| ·序列测定及分析 | 第36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的纯化回收 | 第37-38页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| ·Western-blotting 鉴定 | 第38页 |
| ·重组蛋白免疫鼠血清的Western-blotting 分析 | 第38-39页 |
| ·中和抗体水平检测 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·目的基因的扩增与克隆 | 第39-40页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·目的蛋白的抗原性与免疫原性 | 第40-41页 |
| 3 重组蛋白间接 ELISA 方法的建立 | 第41-51页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·病毒和血清 | 第41页 |
| ·抗体及其他实验材料 | 第41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·间接ELISA 试验条件的优化 | 第41-43页 |
| ·交叉试验 | 第43页 |
| ·重复性试验 | 第43页 |
| ·与IDEXXX 试剂盒比较试验 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-49页 |
| ·最佳包被浓度和阴阳性血清稀释浓度的确定 | 第43-44页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第44页 |
| ·封闭液的确定 | 第44-45页 |
| ·封闭时间的确定 | 第45页 |
| ·待检血清最佳作用时间的确定 | 第45-46页 |
| ·酶标抗体反应时间的确定 | 第46页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第46-47页 |
| ·阴阳性临界值确定 | 第47页 |
| ·特异性试验 | 第47-48页 |
| ·重复性试验 | 第48-49页 |
| ·与IDEXX 试剂盒比较试验 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 在读期间发表的论文 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
