| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-33页 |
| 1 病原学 | 第10-22页 |
| ·APP微生物学特征 | 第11-12页 |
| ·抗原与血清学研究进展 | 第12页 |
| ·APP主要毒力因子及其致病性和免疫原性的研究进展 | 第12-18页 |
| ·荚膜多糖 | 第12-13页 |
| ·脂多糖 | 第13-14页 |
| ·外毒素 | 第14-16页 |
| ·外膜蛋白 | 第16-17页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第17页 |
| ·粘附素 | 第17-18页 |
| ·其它毒力因子 | 第18页 |
| ·APP菌毛研究进展 | 第18-22页 |
| ·APP菌毛的表达特征 | 第19页 |
| ·APP菌毛的基因结构 | 第19页 |
| ·主要的亚单位基因apfA | 第19-21页 |
| ·其他亚单位基因 | 第21页 |
| ·APP菌毛的免疫原性 | 第21-22页 |
| 2 流行病学 | 第22-24页 |
| ·传染源 | 第22页 |
| ·传播途径 | 第22-23页 |
| ·易感动物 | 第23页 |
| ·流行特点 | 第23-24页 |
| 3 临床症状与病理变化 | 第24-25页 |
| ·临床症状 | 第24-25页 |
| ·病理变化 | 第25页 |
| 4 诊断方法 | 第25-29页 |
| ·临床诊断 | 第25-26页 |
| ·病原学诊断 | 第26页 |
| ·血清学诊断 | 第26-28页 |
| ·补体结合试验 | 第26-27页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第27页 |
| ·间接血凝试验 | 第27-28页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第28页 |
| ·其它血清学检测方法 | 第28页 |
| ·分子生物学诊断 | 第28-29页 |
| ·PCR技术 | 第28-29页 |
| ·DNA指纹识别技术 | 第29页 |
| ·核酸杂交技术 | 第29页 |
| 5 防治 | 第29-31页 |
| ·饲养管理 | 第30页 |
| ·免疫防制 | 第30-31页 |
| ·药物预防与治疗 | 第31页 |
| 6 实验研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 apfA基因的克隆与序列分析 | 第33-48页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·试验动物 | 第33页 |
| ·菌株和载体 | 第33页 |
| ·试剂及主要培养基 | 第33-34页 |
| ·溶液配制 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·APP细菌DNA的提取 | 第36页 |
| ·PCR扩增apfA基因 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·apfA基因的PCR扩增 | 第37页 |
| ·apfA基因PCR扩增产物电泳检测 | 第37页 |
| ·APP apfA基因克隆与测序 | 第37-41页 |
| ·四川分离株APP apfA基因生物信息学分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·apfA基因PCR产物 | 第41-42页 |
| ·pMD18-T-apfA重组质粒的PCR及酶切鉴定 | 第42页 |
| ·pMD18-T-apfA重组质粒的序列测定 | 第42-43页 |
| ·APP SC-A株apfA基因生物信息学分析 | 第43-47页 |
| ·四川分离株APP apfA基因生物信息学分析 | 第43-46页 |
| ·apfA基因同源性比较及进化树分析 | 第46-47页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| 第三章 apfA成熟蛋白的原核表达及免疫原性研究 | 第48-74页 |
| ·材料 | 第48-54页 |
| ·菌株和载体 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·溶液配制 | 第48-53页 |
| ·实验动物 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-61页 |
| ·apfA成熟蛋白基因扩增与克隆载体的构建 | 第54页 |
| ·apfA成熟蛋白基因重组表达质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·apfA成熟蛋白基因重组表达质粒的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·apfA成熟蛋白原核表达条件的优化 | 第56页 |
| ·apfA重组成熟蛋白的Western-blot鉴定 | 第56-58页 |
| ·apfA重组蛋白免疫原性研究 | 第58-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-69页 |
| ·apfA成熟蛋白基因扩增及克隆、表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·apfA重组成熟蛋白的诱导表达和可溶性检测 | 第63-64页 |
| ·apfA重组成熟蛋白的表达条件的优化 | 第64-66页 |
| ·apfA重组成熟蛋白Western-blot鉴定 | 第66-67页 |
| ·apfA重组蛋白的纯化 | 第67-68页 |
| ·APP阳性血清的收集 | 第68页 |
| ·APP 1型菌的半数致死量(LD_(50))的确定 | 第68页 |
| ·apfA表达蛋白的最适包被浓度和待检测血清稀释度的确定 | 第68页 |
| ·抗体检测 | 第68-69页 |
| ·攻毒结果 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-74页 |
| ·关于apfA | 第69-70页 |
| ·关于原核表达系统 | 第70-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
