| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-38页 |
| ·研究背景和意义 | 第13-21页 |
| ·环境问题的发展与酶的应用优势 | 第13-14页 |
| ·白腐真菌及其胞外酶 | 第14-18页 |
| ·木质素过氧化物酶的应用研究现状 | 第18-21页 |
| ·大规模生产木质素过氧化物酶的瓶颈问题 | 第21页 |
| ·木质素过氧化物酶异源表达的研究现状 | 第21-25页 |
| ·木质素过氧化物酶的分子生物学 | 第21-22页 |
| ·利用不同表达系统表达木质素过氧化物酶的研究 | 第22-24页 |
| ·现有研究的不足 | 第24-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统介绍 | 第25-33页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的构成 | 第26-29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母在异源表达中的应用 | 第29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌中在表达过程中的主要影响因素 | 第29-33页 |
| ·大肠杆菌中可溶性蛋白表达的研究进展 | 第33-35页 |
| ·研究目的和研究内容 | 第35-38页 |
| ·研究目的 | 第35页 |
| ·研究内容 | 第35-36页 |
| ·技术路线 | 第36-38页 |
| 第2章 LiPH2 基因的获得 | 第38-58页 |
| ·试验方案与技术路线 | 第38-39页 |
| ·试验材料 | 第39-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·培养基和溶液 | 第40-42页 |
| ·主要仪器和设备 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·原始基因的获得 | 第43-54页 |
| ·原始基因的获得方法 | 第43-49页 |
| ·原始基因的获得结果 | 第49-54页 |
| ·合成基因的获得 | 第54-57页 |
| ·合成基因的获得方法 | 第54-55页 |
| ·获得的合成基因的特性 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第3章 LiPH2 原始基因在毕赤酵母中的表达特性 | 第58-94页 |
| ·试验方案与技术路线 | 第58-59页 |
| ·试验材料 | 第59-65页 |
| ·菌株与质粒 | 第59页 |
| ·引物 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·培养基和溶液 | 第61-65页 |
| ·主要仪器和设备 | 第65页 |
| ·LiPH2 原始基因在毕赤酵母中表达的试验方法 | 第65-79页 |
| ·用原始基因构建酵母分泌型重组表达载体 | 第65-68页 |
| ·重组表达载体电转化至Pichia pastoris 得到酵母转化子 | 第68-70页 |
| ·酵母转化子的鉴定、诱导表达和表达产物鉴定 | 第70-76页 |
| ·可分泌表达LiPH2 的酵母转化子发酵条件初步优化 | 第76-77页 |
| ·重组蛋白的分析 | 第77-79页 |
| ·原始基因在毕赤酵母中的表达及表达条件优化 | 第79-90页 |
| ·pPICZαA-O 转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第79-86页 |
| ·pPICZB-On 转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第86-90页 |
| ·LiPH2 原始基因在酵母中表达的重组蛋白特性 | 第90-92页 |
| ·原始蛋白的活性检测 | 第90-91页 |
| ·重组蛋白的活性检测 | 第91-92页 |
| ·本章小结 | 第92-94页 |
| 第4章 LiPH2 合成基因在毕赤酵母中的表达特性 | 第94-133页 |
| ·试验方案与技术路线 | 第94-96页 |
| ·试验材料 | 第96-97页 |
| ·菌株与质粒 | 第96页 |
| ·引物 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96页 |
| ·培养基和溶液 | 第96-97页 |
| ·主要仪器和设备 | 第97页 |
| ·S’和Sn’的获得 | 第97-100页 |
| ·LiPH2 合成基因在毕赤酵母中表达的试验方法 | 第100-104页 |
| ·用合成基因构建酵母分泌型重组表达载体 | 第100-101页 |
| ·重组表达载体电转化至Pichia pastoris 得到酵母转化子 | 第101页 |
| ·酵母转化子的鉴定、诱导表达和表达产物鉴定 | 第101-102页 |
| ·可分泌表达LiPH2 的酵母转化子发酵条件初步优化 | 第102页 |
| ·重组蛋白的分析 | 第102-104页 |
| ·合成基因在毕赤酵母中的表达及表达条件优化 | 第104-126页 |
| ·pPICZαA-S 转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第104-107页 |
| ·pPICZA-Sn 转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第107-112页 |
| ·pPIC9K-S 转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第112-116页 |
| ·pPIC3.5K-Sn 转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第116-121页 |
| ·pPICZαA-S’转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第121-124页 |
| ·pPICZA-Sn’转化酵母菌及酵母转化子的表达 | 第124-126页 |
| ·LiPH2 合成基因在酵母中表达的重组蛋白特性 | 第126-129页 |
| ·活性检测结果 | 第126页 |
| ·亲和层析结果 | 第126-128页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析结果 | 第128-129页 |
| ·LiPH2 在毕赤酵母中表达的特性分析 | 第129-131页 |
| ·本章小结 | 第131-133页 |
| 第5章 LiPH2 原始基因在大肠杆菌中的表达特性 | 第133-155页 |
| ·试验方案与技术路线 | 第133-135页 |
| ·试验材料 | 第135-136页 |
| ·菌株、质粒、引物及主要试剂 | 第135页 |
| ·培养基和溶液 | 第135-136页 |
| ·主要仪器和设备 | 第136页 |
| ·试验方法 | 第136-140页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体与重组菌的构建 | 第136-138页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导表达及其表达产物的分析 | 第138-139页 |
| ·重组大肠杆菌不同诱导温度下表达产物的可溶性及酶活性分析 | 第139-140页 |
| ·试验结果和讨论 | 第140-152页 |
| ·各个方案中的理论目的蛋白序列 | 第140-143页 |
| ·LiPH2 重组蛋白的鉴定及表达量分析 | 第143-148页 |
| ·LiPH2 原始基因在大肠杆菌中表达时的重组蛋白特性 | 第148-152页 |
| ·LiPH2 在毕赤酵母和大肠杆菌中异源表达特性的比较和讨论 | 第152-153页 |
| ·本章小结 | 第153-155页 |
| 第6章 结论和建议 | 第155-158页 |
| ·结论 | 第155-157页 |
| ·建议 | 第157-158页 |
| 参考文献 | 第158-167页 |
| 致谢 | 第167-168页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第168页 |
