| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-21页 |
| 第一章 LAMP 技术的发展及其在水产养殖动物疾病诊断中的应用 | 第13页 |
| 1 LAMP 技术的发展 | 第13-16页 |
| 2 LAMP 技术在水产养殖动物病原检测中的应用 | 第16-19页 |
| ·细菌检测 | 第18页 |
| ·病毒检测 | 第18-19页 |
| ·寄生虫检测 | 第19页 |
| 3 存在的问题与展望 | 第19-21页 |
| 第二章 溶藻弧菌快速检测方法的研究 | 第21-40页 |
| 第一节 溶藻弧菌外膜蛋白OMPK 基因的克隆、表达及特征分析 | 第21-29页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-24页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·工具酶与试剂 | 第22页 |
| ·引物设计与溶藻弧菌Omp K 基因的克隆 | 第22页 |
| ·序列特征和生物信息学分析 | 第22-23页 |
| ·原核表达载体的构建和诱导表达 | 第23页 |
| ·pET-28a-OmpK 重组质粒在大肠杆菌中表达产物的可溶性分析 | 第23-24页 |
| ·表达产物的纯化 | 第24页 |
| ·抗血清制备 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE 和Western blot 分析 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-28页 |
| ·溶藻弧菌OmpK 基因的序列分析 | 第24-26页 |
| ·原核表达和抗血清制备 | 第26页 |
| ·Western blot 检测 | 第26-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 第二节应用酶联免疫吸附法检测溶藻弧菌方法的研究 | 第29-33页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-30页 |
| ·材料与设备 | 第29页 |
| ·间接ELISA 方法实验过程 | 第29-30页 |
| ·棋盘滴定法选择抗原包被浓度和一抗最适工作浓度 | 第30页 |
| ·敏感性实验 | 第30页 |
| ·交叉实验 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-32页 |
| ·抗原、抗体最适工作浓度的确定 | 第30-31页 |
| ·敏感性实验 | 第31页 |
| ·交叉实验 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三节 溶藻弧菌环介导恒温扩增技术检测方法的建立 | 第33-40页 |
| 1 前言 | 第33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-35页 |
| ·菌株 | 第33-34页 |
| ·细菌基因组DNA 抽提 | 第34页 |
| ·LAMP 扩增条件的确立 | 第34-35页 |
| ·LAMP 灵敏度验证 | 第35页 |
| ·LAMP 特异性验证 | 第35页 |
| ·LAMP 扩增结果目视观测 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-38页 |
| ·LAMP 扩增条件的确立 | 第35页 |
| ·LAMP 灵敏度 | 第35-37页 |
| ·LAMP 特异性 | 第37页 |
| ·LAMP 扩增结果目视观测 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 环介导恒温扩增技术快速检测鳗弧菌方法的建立 | 第40-50页 |
| 1 前言 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·细菌基因组DNA 抽提 | 第41页 |
| ·引物设计与合成 | 第41-42页 |
| ·LAMP 扩增条件的确立 | 第42-43页 |
| ·LFD 检测 | 第43页 |
| ·LAMP-AGE、LAMP-LFD 和PCR-AGE 的灵敏度验证 | 第43-44页 |
| ·LAMP-LFD 的特异性验证 | 第44页 |
| ·侵染实验 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-48页 |
| ·LAMP 扩增条件的确立 | 第44-45页 |
| ·LAMP-AGE、LAMP-LFD 和PCR-AGE 的灵敏度验证 | 第45-47页 |
| ·LAMP-LFD 特异性 | 第47页 |
| ·人工侵染香鱼组织中的鳗弧菌检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 传染性脾肾坏死病毒LAMP 检测方法的建立 | 第50-63页 |
| 第一节 传染性脾肾坏死病毒DNA 聚合酶的克隆和序列分析 | 第50-56页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-51页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·引物设计与ISKNV DPOL 基因的克隆 | 第51页 |
| ·序列特征和生物信息学分析 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| ·ISKNV DPOL 基因序列及分析 | 第51-53页 |
| ·氨基酸序列比较 | 第53-54页 |
| ·系统进化分析 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第二节LAMP 技术结合横向流动试纸条快速检测传染性脾肾坏死病毒 | 第56-63页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-59页 |
| ·病毒基因组DNA | 第56页 |
| ·引物的设计与合成 | 第56-57页 |
| ·LAMP 扩增条件的确立 | 第57-58页 |
| ·生物素标记的LAMP 扩增 | 第58页 |
| ·探针杂交和 LFD 检测 | 第58页 |
| ·LAMP-AGE 和LAMP-LFD 的灵敏度验证 | 第58页 |
| ·PCR-AGE 的灵敏度验证 | 第58页 |
| ·LAMP 特异性验证 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-62页 |
| ·LAMP 扩增条件的确立 | 第59-60页 |
| ·LAMP 灵敏度 | 第60-61页 |
| ·LAMP-AGE 和LAMP-LFD 的特异性 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 环介导恒温扩增技术快速检测对虾白斑综合症病毒方法的建立 | 第63-69页 |
| 1 引言 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·重组质粒的构建 | 第64页 |
| ·引物设计与合成 | 第64-65页 |
| ·LAMP 扩增反应 | 第65页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第65页 |
| ·LAMP 扩增结果目视观测 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-67页 |
| ·LAMP 灵敏度 | 第65页 |
| ·LAMP 特异性验证 | 第65-66页 |
| ·LAMP 扩增结果目视观测 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 结语 | 第69-70页 |
| 1 主要研究成果 | 第69页 |
| 2. 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 附录A：主要试剂和仪器 | 第82-83页 |
| 附录B：主要试剂的配制 | 第83-86页 |
| 附录C：Western-blot 的操作步骤 | 第86-87页 |
| 在学研究成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
