| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| ·牛轮状病毒感染流行及其主要血清型 | 第12-13页 |
| ·牛轮状病毒主要结构蛋白及其功能特性 | 第13页 |
| ·轮状病毒感染及发病机理 | 第13-14页 |
| ·轮状病毒疫苗的发展研究进展 | 第14-16页 |
| ·人轮状病毒疫苗研究进展 | 第14-15页 |
| ·动物轮状病毒疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| ·刺激黏膜免疫反应的活菌载体疫苗研究进展 | 第16-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·病毒与细胞 | 第19页 |
| ·质粒、菌种 | 第19页 |
| ·抗体制剂 | 第19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·引物 | 第19-20页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·主要溶液配制 | 第20-21页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-34页 |
| ·牛轮状病VP7 基因扩增 | 第21-23页 |
| ·牛轮状病毒VP7 基因在大肠杆菌中的构建 | 第23-27页 |
| ·VP7 基因在大肠杆菌中的诱导表达和免疫原性分析 | 第27-28页 |
| ·重组干酪乳杆菌表达系统构建 | 第28-32页 |
| ·VP7 基因在重组干酪乳杆菌中的表达 | 第32页 |
| ·口服重组乳酸菌免疫学评价 | 第32-34页 |
| 3 结果 | 第34-47页 |
| ·牛轮状病VP7 基因克隆与序列测定 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第34页 |
| ·重组质粒pMD18-T-VP7 的鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·序列测定结果 | 第35页 |
| ·表达VP7 基因重组大肠杆菌的构建 | 第35-36页 |
| ·VP7 的获得 | 第35页 |
| ·pMD18-TS-VP7 重组质粒鉴定 | 第35-36页 |
| ·pET-32a-VP7 重组质粒鉴定 | 第36页 |
| ·重组大蛋白表达分析及免疫活性分析 | 第36-39页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 鉴定 | 第36-37页 |
| ·表达产物的可溶性分析及纯化鉴定 | 第37页 |
| ·重组VP7 蛋白免疫活性的分析 | 第37-39页 |
| ·重组干酪乳杆菌乳酸菌表达系统的构建 | 第39-41页 |
| ·表达基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·pMD18-TS-VP7 重组质粒鉴定 | 第40页 |
| ·表面表达重组载体pPG-1-VP7 的鉴定 | 第40页 |
| ·分泌表达重组载体pPG-2-VP7 的鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组干酪乳杆菌的诱导及表达蛋白的鉴定 | 第41-44页 |
| ·表达产物Western blot 鉴定 | 第41-42页 |
| ·pPG-1-VP7/L.casei393 间接免疫荧光鉴定 | 第42页 |
| ·重组菌pPG-2-VP7/L.casei393 上清浓缩物Western blot 鉴定 | 第42-44页 |
| ·重组干酪乳杆菌免疫效果评价 | 第44-47页 |
| ·血清IgG 的测定 | 第44页 |
| ·小鼠外生殖道黏液sIgA 的测定 | 第44-45页 |
| ·小鼠粪便 sIgA 的测定 | 第45-46页 |
| ·小鼠血清中和抗体的测定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| ·牛轮状病毒VP7 蛋白的免疫保护作用 | 第47-48页 |
| ·构建的重组干酪乳杆菌外源蛋白表达情况 | 第48页 |
| ·小鼠口服重组乳菌诱导的局部粘膜免疫应答和系统免疫应答 | 第48-50页 |
| ·表达 VP7 蛋白重组干酪乳杆菌黏膜作为口服疫苗的潜在应用 价值 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
