内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中高效表达及其结构域重构研究
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 纤维素的研究进展 | 第10-12页 |
| ·纤维素的分子结构 | 第10-11页 |
| ·纤维素底物 | 第11-12页 |
| 2 纤维素酶的研究进展 | 第12-18页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的组成和作用机制 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第14页 |
| ·纤维素酶的分子生物学研究进展 | 第14-18页 |
| 3 巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第18-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第18页 |
| ·毕赤酵母的基因工程操作 | 第18-20页 |
| ·影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素 | 第20-21页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中发酵密度 | 第21-22页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中高效表达研究 | 第24-45页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·菌株与载体 | 第24-25页 |
| ·试剂与溶液 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-35页 |
| ·重组表达载体构建 | 第26-32页 |
| ·重组表达载体电击转化 | 第32-33页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·内切葡聚糖酶酶活力测定 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-42页 |
| ·内切葡聚糖酶基因表达片段的PCR扩增 | 第35页 |
| ·重组质粒pPIC9k-End构建 | 第35-36页 |
| ·电击转化及酵母阳性菌落筛选 | 第36-37页 |
| ·内切葡聚糖酶重组酵母表达条件的优化 | 第37-40页 |
| ·内切葡聚糖酶酵母工程菌的诱导表达 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| ·内切葡聚糖酶的克隆和表达 | 第42页 |
| ·重组表达载体构建 | 第42-43页 |
| ·毕赤酵母表达研究 | 第43页 |
| ·表达条件优化研究 | 第43-44页 |
| ·重组内切葡聚糖酶检测和热稳定性分析 | 第44-45页 |
| 第三章 内切葡聚糖酶结构域重构研究 | 第45-61页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·菌株与载体 | 第45-46页 |
| ·试剂与溶液 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| ·内切葡聚糖酶结构域分析 | 第46-47页 |
| ·重构基因重组表达载体构建 | 第47-49页 |
| ·重组表达载体电击转化 | 第49-50页 |
| ·重构酶酶学性质研究 | 第50页 |
| ·内切葡聚糖酶酶活性测定 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-58页 |
| ·内切葡聚糖酶结构域分析 | 第51页 |
| ·内切葡聚糖酶结构域序列扩增 | 第51-52页 |
| ·重组表达质粒构建 | 第52-53页 |
| ·电击转化及毕赤酵母诱导表达 | 第53-54页 |
| ·重构酶作用非溶性底物分析 | 第54-55页 |
| ·重构酶酶学性质分析 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| ·内切葡聚糖酶重构酶构建 | 第58-59页 |
| ·重构酶酶活力比较 | 第59页 |
| ·重构酶的酶学性质分析 | 第59-60页 |
| ·研究意义和应用前景 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第70页 |
