| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.研究进展 | 第11-18页 |
| ·IFN的分类以及基本性质 | 第12-13页 |
| ·IFN的诱导 | 第13-15页 |
| ·IFN的诱导起源 | 第13页 |
| ·IFN的诱导剂 | 第13-14页 |
| ·IFN的诱导机制 | 第14页 |
| ·IFN的其它诱导条件 | 第14-15页 |
| ·IFN的生物学活性 | 第15-16页 |
| ·抗病毒作用 | 第15-16页 |
| ·免疫作用 | 第16页 |
| ·鱼类IFN的信号传导途径 | 第16-17页 |
| ·IFN的应用 | 第17-18页 |
| 2.IFN的克隆与表达 | 第18-20页 |
| 3.实验目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 斑点叉尾鮰α干扰素基因真核表达载pPICZ α-IFN-α的构建 | 第21-36页 |
| 1 材料 | 第21-25页 |
| ·试剂与引物 | 第21-22页 |
| ·菌株与载体 | 第22-23页 |
| ·溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.方法 | 第25-31页 |
| ·斑点叉尾鮰IFN-α的PCR扩增、克隆和鉴定 | 第25-28页 |
| ·引物设计和合成 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第26页 |
| ·斑点叉尾鮰IFN-α与pMD18-T克隆载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·pMD18-IFN-α序列测定 | 第28页 |
| ·重组真核表达质粒的构建 | 第28-31页 |
| ·pMD18-IFN-α与表达载体pPICZ α A的双酶切 | 第28-29页 |
| ·酶切产物的回收和纯化 | 第29页 |
| ·pMD18-IFN-α与pPICZ α A双酶切产物的连接 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·重组真核表达质粒的PCR鉴定 | 第30页 |
| ·pPICZ α A-IFN-α的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·pPICZ α A-IFN-α的序列测定 | 第31页 |
| 3.结果 | 第31-35页 |
| ·斑点叉尾鮰IFN-α的鉴定 | 第31-33页 |
| ·斑点叉尾鮰IFN-α的PCR产物电泳鉴定 | 第31-32页 |
| ·pMD18-IFN-α的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·pMD-IFN-α的酶切结果 | 第33页 |
| ·斑点叉尾鮰IFN-α真核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·重组真核表达质粒PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·pPICZ α A-IFN-α双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·pPICZ α A-IFN-α的测序 | 第34-35页 |
| 4.讨论 | 第35-36页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·pPICZ α A和pMD-IFN-α双酶切 | 第35页 |
| ·抗生素Zeocin的筛选浓度 | 第35-36页 |
| 第三章 斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达 | 第36-51页 |
| 1.材料 | 第37-41页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·细胞与病毒 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE溶液的配制 | 第38-40页 |
| ·考马斯亮兰染色系统 | 第40页 |
| ·细胞培养用液 | 第40-41页 |
| ·主要仪器与设备 | 第41页 |
| 2.方法 | 第41-45页 |
| ·携带目的基因的重组酵母的构建 | 第41-43页 |
| ·毕赤酵母X33感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·重组质粒pPICZ α A-IFN-α的线性化及回收 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pPICZ α A-IFN-α的电击转化 | 第42页 |
| ·重组酵母基因组PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·高抗性整合子的初步诱导表达 | 第43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·考马斯亮蓝染色与脱色 | 第44页 |
| ·IFN生物学活性检测 | 第44-45页 |
| ·水泡性口膜炎病毒(VSV)的扩增与保存 | 第44页 |
| ·VSV TCID_(50)的滴定 | 第44页 |
| ·CCO细胞上干扰素的抗病毒活性 | 第44-45页 |
| 3.结果 | 第45-49页 |
| ·重组质粒pPICZ α A-IFN-α线性化 | 第45-46页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第46页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·生物学活性检测 | 第47-49页 |
| ·VSV效价的滴定 | 第47-48页 |
| ·CCO细胞内干扰素的抗病毒生物活性 | 第48-49页 |
| 4.讨论 | 第49-51页 |
| ·重组真核表达质粒的线性化 | 第49页 |
| ·重组质粒线性化的回收 | 第49页 |
| ·温度对酵母表达的影响 | 第49页 |
| ·斑点叉尾鮰α干扰素的生物学活性测定 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56页 |
