| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 引言 | 第21-23页 |
| 第一章IBDV 单克隆抗体的制备及其抗原表位初步分析 | 第23-32页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·病毒、细胞株及试验动物 | 第23页 |
| ·主要试剂与器材 | 第23页 |
| ·主要试验试剂配制 | 第23-24页 |
| ·IBDV 病毒的增殖与纯化 | 第24页 |
| ·抗IBDV 单克隆抗体的制备 | 第24-27页 |
| ·IBDV 免疫Balb/c 小鼠 | 第24页 |
| ·骨髓瘤细胞和脾淋巴细胞准备 | 第24-25页 |
| ·间接ELISA 筛选方法的建立和阳性细胞株筛选 | 第25-26页 |
| ·阳性细胞株亚克隆和冻存与复苏 | 第26页 |
| ·单抗腹水的制备 | 第26-27页 |
| ·单抗的鉴定与分析 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| ·抗IBDV 单克隆抗体的制备 | 第28页 |
| ·间接ELISA 筛选方法的建立 | 第28页 |
| ·抗IBDV 单抗的筛选和亚克隆 | 第28页 |
| ·抗IBDV 单克隆抗体的鉴定 | 第28-31页 |
| ·ELISA 效价的测定 | 第28-29页 |
| ·单抗亚型的鉴定 | 第29页 |
| ·特异性分析 | 第29页 |
| ·细胞分泌抗体的稳定性试验 | 第29页 |
| ·单抗针对的抗原性分析 | 第29-31页 |
| 3 讨论 | 第31页 |
| 4 结论 | 第31-32页 |
| 第二章IBDV-VP2 基因的原核表达及其单克隆抗体的制备 | 第32-54页 |
| 1 材料与方法 | 第32-42页 |
| ·载体、宿主菌与实验动物 | 第32页 |
| ·主要试剂和器材 | 第32页 |
| ·主要试剂配制 | 第32-34页 |
| ·IBDV-VP2 基因的克隆 | 第34-37页 |
| ·IBDV 总RNA 的提取与cDNA 的制备 | 第34-35页 |
| ·IBDV-VP2 基因的扩增 | 第35页 |
| ·重组质粒的构建 | 第35-37页 |
| ·pET32a-VP2，pGEX-4T-1-VP2 基因的诱导表达 | 第37-40页 |
| ·IPTG 诱导剂浓度的优化 | 第37页 |
| ·诱导时间的优化 | 第37-38页 |
| ·可溶性鉴定 | 第38页 |
| ·蛋白的大量制备 | 第38页 |
| ·HIS-VP2 蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·HIS-VP2 蛋白的分析 | 第39-40页 |
| ·抗IBDV-VP2 蛋白单克隆抗体制备 | 第40-41页 |
| ·免疫 | 第40页 |
| ·细胞融合 | 第40页 |
| ·间接ELISA 筛选方法的建立和阳性株的筛选 | 第40页 |
| ·阳性细胞株亚克隆和细胞冻存与复苏 | 第40页 |
| ·单抗的大量制备 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体的鉴定与分析 | 第41-42页 |
| ·ELISA 效价的测定 | 第41页 |
| ·单抗亚类的鉴定 | 第41页 |
| ·特异性分析 | 第41页 |
| ·细胞分泌抗体的稳定性试验 | 第41页 |
| ·单抗针对的抗原性分析 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-52页 |
| ·IBDV-VP2 基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·IBDV总RNA的提取 | 第42页 |
| ·IBDV-VP2 基因的扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第43-46页 |
| ·IPTG 浓度优化结果 | 第44-45页 |
| ·诱导时间的优化 | 第45页 |
| ·表达蛋白的可溶性分析 | 第45页 |
| ·HIS-VP2 蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·纯化蛋白的分析 | 第46-47页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第46页 |
| ·VP2 蛋白的抗原性分析 | 第46-47页 |
| ·抗IBDV-VP2 蛋白单克隆抗体制备 | 第47-49页 |
| ·间接ELISA 筛选方法的建立 | 第47-49页 |
| ·抗IBDV-VP2 单抗的筛选和亚克隆 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的鉴定与分析 | 第49-52页 |
| ·ELISA 效价的测定 | 第49页 |
| ·单抗亚型的鉴定 | 第49页 |
| ·特异性分析 | 第49-50页 |
| ·细胞分泌抗体的稳定性试验 | 第50页 |
| ·单抗针对的抗原性分析 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章IBDV 安徽分离株VP2 基因的克隆及序列分析 | 第54-63页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| ·载体、宿主菌及病料 | 第54页 |
| ·主要试剂和器材及主要试剂的配制 | 第54页 |
| ·病料采集和保存 | 第54页 |
| ·IBDV-VP2 高变区的克隆 | 第54-55页 |
| ·IBDV 总RNA 的提取与cDNA 的制备 | 第54页 |
| ·IBDV-VP2 高变区基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的构建 | 第55页 |
| ·IBDV-VP2 高变区测序结果的序列分析 | 第55-56页 |
| 2 结果 | 第56-60页 |
| ·IBDV 总RNA 提取和RT-PCR | 第56页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第56-57页 |
| ·VP2 高变区测序结果分析 | 第57-60页 |
| ·VP2 高变区基因和推导氨基酸的序列分析 | 第57-58页 |
| ·VP2 高变区基因和推导氨基酸的同源性分析 | 第58-59页 |
| ·VP2 高变区基因和推导氨基酸的进化树分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
