| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 序言 | 第12-24页 |
| ·木质素 | 第12-15页 |
| ·木质素单体的种类 | 第13页 |
| ·木质素单体的合成过程 | 第13-15页 |
| ·木质素的生物合成途径 | 第15-16页 |
| ·木质素调控与遗传改良 | 第16-19页 |
| ·木质素合成途径的关键酶研究 | 第16-18页 |
| ·本实验选用的研究基因-4-香豆酸辅酶A连接酶 | 第18-19页 |
| ·RNAI技术与靶基因下调表达调控 | 第19-22页 |
| ·作用机理 | 第20-21页 |
| ·在植物生物学方面的应用 | 第21-22页 |
| ·植物遗传转化技术现状 | 第22页 |
| ·研究目的意义、主要内容及技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 马尾松4CL基因的全长克隆及生物信息学分析 | 第24-44页 |
| ·材料与试剂 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·药品与试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·溶液及培养基 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·马尾松总DNA的改良CTAB法提取 | 第25页 |
| ·马尾松次生木质部总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·反转录合成cDNA第一条链 | 第26-27页 |
| ·设计引物 | 第27页 |
| ·长距离PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·DNA片段纯化与回收 | 第28-29页 |
| ·T-A克隆 | 第29-30页 |
| ·重组子鉴定 | 第30页 |
| ·质粒提取 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-42页 |
| ·马尾松4CL的全长基因组DNA克隆 | 第31-33页 |
| ·马尾松4CL的全长cDNA克隆 | 第33-35页 |
| ·马尾松4CL基因的生物信息学分析 | 第35-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 马尾松4CL基因的原核表达 | 第44-54页 |
| ·材料与试剂 | 第44-46页 |
| ·菌株与质粒 | 第44-45页 |
| ·药品与试剂 | 第45页 |
| ·常用缓冲液和相关溶液 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·质粒制备 | 第46页 |
| ·PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·目的片段回收 | 第47页 |
| ·回收产物的双酶切及再次回收 | 第47页 |
| ·DNA连接 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)转化 | 第48页 |
| ·重组子鉴定 | 第48页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中诱导与SDS-PAGE检测 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第49-50页 |
| ·不同诱导时间对蛋白表达量的影响 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 第四章 马尾松4CL基因的RNA干扰载体构建及功能验证 | 第54-70页 |
| ·材料与试剂 | 第54-56页 |
| ·菌株与质粒 | 第54-55页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-63页 |
| ·干扰片断的获得 | 第56-57页 |
| ·植物RNA干扰载体构建 | 第57-61页 |
| ·干扰载体转化农杆菌 | 第61-62页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法侵染烟草 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-69页 |
| ·RNA干扰片段的克隆 | 第63-65页 |
| ·正义基因干扰片段的转载 | 第65页 |
| ·反义基因干扰片段的转载 | 第65-66页 |
| ·pRi35s-4CLzf的农杆菌转化检测 | 第66页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第66-68页 |
| ·转基因植株的木质素含量检测 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第70-72页 |
| ·结论 | 第70页 |
| ·创新点 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间主要学术成果 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |