| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| ·研究的目的与意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-24页 |
| ·酸性蛋白酶研究进展 | 第13-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第15-18页 |
| ·丝状真菌表达系统研究进展 | 第18-24页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌种与载体 | 第25页 |
| ·试剂及酶类 | 第25页 |
| ·酶活测定所需试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·基因扩增引物 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·宇佐美曲霉RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA 的反转录 | 第28页 |
| ·黑曲霉/瑞氏木霉DNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·表达载体的构建 | 第30页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第30-31页 |
| ·根瘤农杆菌介导的遗传转化 | 第31页 |
| ·重组子的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组子的表达 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-58页 |
| ·宇佐美曲霉pepA 基因在毕赤酵母中的表达 | 第33-38页 |
| ·宇佐美曲霉RNA 的提取 | 第33页 |
| ·毕赤酵母表达用pepA 基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·pepA 基因酵母表达载体构建 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第35-37页 |
| ·重组菌株的表达 | 第37-38页 |
| ·宇佐美曲霉pepA 基因在黑曲霉中的表达 | 第38-58页 |
| ·黑曲霉pyrA 基因缺失突变体的构建 | 第38-44页 |
| ·pyrA 基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·pyrA-基因的获得 | 第39-40页 |
| ·pyrA 基因和pyrA-基因表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒冻融法转化农杆菌 | 第42-43页 |
| ·根瘤农杆菌介导pyrA-基因转化黑曲霉UV48 | 第43-44页 |
| ·黑曲霉kusA（ku70）基因缺失突变体的构建 | 第44-51页 |
| ·kusA 5'同源臂和3'同源臂基因、瑞氏木霉pyrG 基因表达框的克隆 | 第44-47页 |
| ·黑曲霉 kusA-（ku70-）基因表达载体的构建 | 第47-50页 |
| ·kusA-基因表达载体冻融法转化农杆菌 | 第50-51页 |
| ·宇佐美曲霉pepA 基因替换glaA 基因的研究 | 第51-58页 |
| ·glaA 基因启动子和终止子、宇佐美曲霉酸性蛋白酶 pepA 基因的克隆 | 第51-54页 |
| ·宇佐美曲霉 pepA 基因表达载体的构建 | 第54-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| ·重叠延伸PCR 的应用 | 第58页 |
| ·转化子的筛选 | 第58页 |
| ·丝状真菌同源重组效率低的问题 | 第58-59页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| ·基因的扩增 | 第60页 |
| ·表达载体的构建 | 第60页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第60页 |
| ·pepA 基因在毕赤酵母中的表达 | 第60页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
