| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-25页 |
| ·病原学 | 第11-12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·发病机制 | 第13-14页 |
| ·病毒分子生物学特征 | 第14-16页 |
| ·诊断方法研究进展 | 第16-19页 |
| ·疫苗研究进展 | 第19-21页 |
| ·高致病性PRRS 的研究概况 | 第21-23页 |
| ·本研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与仪器 | 第25-28页 |
| ·毒株、病料 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·试验所需主要溶液及其配制 | 第27-28页 |
| ·RNA 提取所用溶液 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化所用试剂 | 第27-28页 |
| 3 试验方法 | 第28-37页 |
| ·引物的设计与合成 | 第28页 |
| ·PRRV 总RNA 的提取 | 第28页 |
| ·反转录合成CDNA | 第28-29页 |
| ·PCR 扩增部分NSP2 基因 | 第29页 |
| ·PCR 产物的凝胶回收纯化 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第30-31页 |
| ·目的片段与PMD~(TM)19-T 载体的连接 | 第30页 |
| ·Top10 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·转化平板的制备 | 第31页 |
| ·连接产物转化Top10 感受态细胞 | 第31页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR 方法筛选阳性克隆 | 第32页 |
| ·目的基因的序列测定及序列分析 | 第32页 |
| ·PCR 反应条件优化 | 第32-33页 |
| ·引物浓度优化 | 第32页 |
| ·Taq DNA 聚合酶浓度优化 | 第32页 |
| ·dNTP 浓度优化 | 第32-33页 |
| ·退火温度优化 | 第33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·敏感性试验 | 第33页 |
| ·重复性试验 | 第33页 |
| ·临床应用性试验 | 第33页 |
| ·与其他诊断方法的对比试验 | 第33页 |
| ·PRRSV 河北地方株的分离鉴定 | 第33-37页 |
| ·病毒的分离 | 第34页 |
| ·分离病毒的RT-PCR 鉴定 | 第34-36页 |
| ·分离株部分 Nsp2 基因遗传变异分析 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第37页 |
| ·PCR 产物的克隆、鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆质粒序列测定结果 | 第38页 |
| ·RT-PCR 反应条件优化结果 | 第38-39页 |
| ·特异性试验结果 | 第39页 |
| ·敏感性试验结果 | 第39-40页 |
| ·重复性试验结果 | 第40页 |
| ·临床应用性试验 | 第40页 |
| ·与其他检测方法的对比试验结果 | 第40页 |
| ·病毒分离结果 | 第40-41页 |
| ·分离毒株的RT-PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·部分NSP2 基因的纯化、连接与克隆 | 第41页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆质粒序列测定结果 | 第42-43页 |
| ·4 株分离株NSP2 基因高变区序列分析 | 第43-47页 |
| ·所测得Nsp2 主要遗传变异 | 第43页 |
| ·与国内外分离株的同源性分析 | 第43-46页 |
| ·分离株部分Nsp2 基因与国内外分离株的进化树分析 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| ·建立高致病性PRRV 鉴别诊断方法的意义 | 第47页 |
| ·本诊断方法的特点 | 第47页 |
| ·病毒的分离 | 第47-48页 |
| ·分离株部分NSP2 基因的遗传变异 | 第48-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 在读期间发表论文 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |