| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分:梅山猪和大白猪FIT1基因真核表达载体的构建 | 第18-45页 |
| 1. 研究目的 | 第18页 |
| 2. 材料和方法 | 第18-33页 |
| ·试验材料 | 第18-23页 |
| ·实验样品 | 第18-19页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第19页 |
| ·常用缓冲液及其配制 | 第19-20页 |
| ·主要的仪器设备和耗材 | 第20页 |
| ·主要的生物学网站和生物学分析工具 | 第20-21页 |
| ·所用到的载体 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·梅山和大白猪FIT1基因全长的获取 | 第24-27页 |
| ·梅山猪和大白猪FIT1基因真核表达载体的构建 | 第27-33页 |
| ·荧光蛋白融合超表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·pcDNA3.1(+)-msFIT1和pcDNA3.1(+)-dbFIT1真核超表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·phc-Red-N1-dbFIT1表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3. 结果与分析 | 第33-43页 |
| ·FIT1基因的扩增结果 | 第33-36页 |
| ·基因组DNA的提取结果 | 第33-34页 |
| ·从基因组中扩增FIT1全长的结果 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆子的鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·pcDNA3.1-msFIT1-EGFP和pcDNA3.1-dbFIT1荧光融合超表达载体的构建结果 | 第36-40页 |
| ·提取质粒的双酶切结果 | 第36页 |
| ·pEGFP-msFIT1和pEGFP-dbFIT1的克隆检测结果 | 第36-37页 |
| ·pEGFP-dbFIT1a/b和pEGFP-msFIT1a/b双重双酶切的结果 | 第37-38页 |
| ·载体连接作克隆检测结果 | 第38-39页 |
| ·pcDNA3.1-msFIT1-EGFP和pcDNA3.1-msFIT1-EGFP质粒酶切结果 | 第39-40页 |
| ·pcDAN3.1-msFIT1和pcDNA3.1-dbFIT1真核超表达载体的构建结果 | 第40-42页 |
| ·T-pc-msFIT1、T-pc-dbFIT1和pcDNA3.1(+)质粒提取的结果 | 第40页 |
| ·质粒酶切结果 | 第40-41页 |
| ·pcDNA3.1-msFIT1和pcDNA3.1-dbFIT1超表达载体的克隆检测和质粒酶切结果 | 第41-42页 |
| ·phc-Red-dbFIT1质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·质粒的双酶切结果 | 第42-43页 |
| ·phc-Red-dbFIT1克隆阳性检测结果 | 第43页 |
| ·phc-Red-dbFIT1质粒双酶切结果 | 第43页 |
| 4. 小结讨论 | 第43-45页 |
| 第二部分:FIT1基因梅山型和大白型真核表达载体对PK-15细胞的转染 | 第45-75页 |
| 1. 研究目的 | 第45-46页 |
| 2. 材料、试剂和方法 | 第46-59页 |
| ·实验材料及准备 | 第46-47页 |
| ·玻璃器皿的准备 | 第46页 |
| ·金属器皿的准备 | 第46页 |
| ·塑料用品的准备 | 第46-47页 |
| ·胶塞的处理 | 第47页 |
| ·细胞培养板、培养瓶、塑料移液管的准备 | 第47页 |
| ·细胞染色用盖玻片的准备 | 第47页 |
| ·其它耗材的准备 | 第47页 |
| ·消毒和灭菌 | 第47-49页 |
| ·消毒 | 第47-48页 |
| ·灭菌 | 第48-49页 |
| ·试验所需试剂的准备 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-59页 |
| ·PK-15细胞培养特性探索 | 第49-50页 |
| ·两种转染试剂转染效果的比较 | 第50-56页 |
| ·确定所构建的质粒能否成功表达荧光 | 第56-57页 |
| ·同一转染体系对不同细胞进行转染时转染效率比较 | 第57-58页 |
| ·对PK-15细胞的转染及荧光共聚焦观察 | 第58-59页 |
| 3. 结果与分析 | 第59-73页 |
| ·PK-15细胞常规培养结果 | 第59-60页 |
| ·两种转染试剂的对比结果 | 第60-67页 |
| ·各种质粒的转染结果 | 第67-69页 |
| ·同一转染体系对PK-15细胞和C2C12细胞转染效果的比较 | 第69-71页 |
| ·荧光共聚焦观察结果 | 第71-73页 |
| 4. 小结讨论 | 第73-75页 |
| 第三部分:全文讨论总结 | 第75-85页 |
| 1. 讨论 | 第75-81页 |
| 2. 下一步工作 | 第81-83页 |
| 3. 总结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 附录 | 第93-94页 |
