| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1 结核菌耐药形势 | 第14页 |
| 2 结核菌耐药机理 | 第14-16页 |
| 2.1 结核分枝杆菌细胞壁 | 第14-15页 |
| 2.2 外排泵 | 第15页 |
| 2.3 靶位突变 | 第15-16页 |
| 2.4 CRISPR-Cas系统 | 第16页 |
| 2.5 代谢相关基因 | 第16页 |
| 3 新型抗菌方法 | 第16-20页 |
| 3.1 新型抗生素或抑制剂 | 第17页 |
| 3.2 金属离子与抗生素 | 第17-18页 |
| 3.3 小分子与抗生素 | 第18-19页 |
| 3.4 噬菌体与抗生素 | 第19-20页 |
| 3.5 抗体与抗生素 | 第20页 |
| 4 结核分枝杆菌蛋白质降解 | 第20-21页 |
| 5 氟喹诺酮类药物 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-34页 |
| 第2章 绪论 | 第34-38页 |
| 1 选题依据、研究目的与意义 | 第34-35页 |
| 2 科学问题 | 第35页 |
| 3 研究内容与技术路线 | 第35-38页 |
| 第3章 结核分枝杆菌蛋白酶体附属因子pafC在氟喹诺酮类药物抗性中的作用与机理 | 第38-54页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 实验材料 | 第38-40页 |
| 2.1 质粒、菌株及引物 | 第38-39页 |
| 2.2 培养基 | 第39页 |
| 2.3 主要试剂 | 第39页 |
| 2.4 主要溶液配置 | 第39-40页 |
| 2.5 主要仪器 | 第40页 |
| 3 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.1 细菌培养 | 第40-41页 |
| 3.2 重组质粒pALACE-pafC构建 | 第41页 |
| 3.3 回补菌株M371-pALACE-pafC构建 | 第41-42页 |
| 3.4 生长曲线测定 | 第42页 |
| 3.5 MIC测定 | 第42页 |
| 3.6 抗生素杀菌动力曲线 | 第42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-49页 |
| 4.1 M371与野生型耻垢分枝杆菌生长曲线的比较 | 第42-43页 |
| 4.2 M371转座子插入位点及同源基因分析 | 第43-45页 |
| 4.3 基因pafC的失活增加细菌对氟喹诺酮类药物的敏感性 | 第45-46页 |
| 4.4 M371与野生型菌株在氟喹诺酮类药物处理下的存活率 | 第46-47页 |
| 4.5 M371与野生型对H_2O_2的胁迫应答 | 第47-48页 |
| 4.6 硫脲和2’2-联吡啶对莫西沙星杀菌作用的影响 | 第48-49页 |
| 4.7 M371与野生型菌株在酸性的亚硝酸钠处理下的存活率 | 第49页 |
| 5 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第4章 结核分枝杆菌IclR家族转录因子Rv2989在异烟肼胁迫应答中的作用及机理研究 | 第54-72页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 实验材料 | 第54-56页 |
| 2.1 质粒、菌株及引物 | 第54-55页 |
| 2.2 培养基 | 第55页 |
| 2.3 试剂 | 第55-56页 |
| 3 实验方法 | 第56-61页 |
| 3.1 细菌培养 | 第56页 |
| 3.2 无标记MSMEG_2386敲除菌株的构建与鉴定 | 第56页 |
| 3.3 异烟肼胁迫下的生长曲线测定 | 第56页 |
| 3.4 MIC测定 | 第56-57页 |
| 3.5 RNA的提取与qRT-PCR | 第57-58页 |
| 3.6 蛋白浓度测定 | 第58-59页 |
| 3.7 全细胞裂解液中过氧化氢酶活性测定 | 第59-61页 |
| 3.8 细菌在巨噬细胞中的存活率测定方法 | 第61页 |
| 4 结果与分析 | 第61-67页 |
| 4.1 IclR家族蛋白Rv2989保守性分析 | 第61-63页 |
| 4.2 耻垢分枝杆菌MSMEG_2386敲除菌构建 | 第63页 |
| 4.3 耻垢分枝杆菌MSMEG_2386敲除菌株增加异烟肼的敏感性 | 第63-65页 |
| 4.4 耻垢分枝杆菌MSMEG_2386敲除菌株不能改变乙硫异烟胺的敏感性 | 第65-66页 |
| 4.5 耻垢分枝杆菌MSMEG_2386敲除导致katG和fur基因转录水平升高 | 第66页 |
| 4.6 耻垢分枝杆菌MSMEG_2386敲除导致过氧化氢酶活性升高 | 第66-67页 |
| 4.7 耻垢分枝杆菌MSMEG_2386敲除降低了耻垢分枝杆菌在巨噬细胞中的存活率 | 第67页 |
| 5 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第5章 分枝杆菌噬菌体SWU1gp39的功能研究 | 第72-96页 |
| 1 引言 | 第72页 |
| 2 实验材料 | 第72-74页 |
| 2.1 质粒、菌株及引物 | 第72-73页 |
| 2.2 培养基 | 第73页 |
| 2.3 试剂 | 第73-74页 |
| 3 实验方法 | 第74-78页 |
| 3.1 细菌培养 | 第74页 |
| 3.2 Western Blotting | 第74-75页 |
| 3.3 潮霉素B胁迫下的生长曲线测定 | 第75页 |
| 3.4 MIC测定 | 第75页 |
| 3.5 抗生素杀菌动力曲线 | 第75页 |
| 3.6 环境压力胁迫实验 | 第75-76页 |
| 3.7 RNA-seq | 第76页 |
| 3.8 脂肪酸提取及气相色谱分析 | 第76页 |
| 3.9 扫描电镜 | 第76-77页 |
| 3.10 透射电镜 | 第77页 |
| 3.11 抗酸染色 | 第77页 |
| 3.12 细胞壁通透性检测 | 第77-78页 |
| 3.13 活性氧水平检测 | 第78页 |
| 4 结果与分析 | 第78-90页 |
| 4.1 分枝杆菌噬菌体SWU1基因gp39的基本特性 | 第78-80页 |
| 4.2 SWU1gp39及同源基因成功表达于模式菌株耻垢分枝杆菌 | 第80-81页 |
| 4.3 重组菌株WT-pAL-gp39在潮霉素B胁迫下的生长曲线 | 第81页 |
| 4.4 重组菌株WT-pAL-gp39在抗生素压力下的存活率 | 第81-82页 |
| 4.5 重组菌株WT-pAL-gp39在环境压力下的存活率 | 第82-83页 |
| 4.6 Gp39调节耻垢分枝杆菌基因的转录 | 第83-87页 |
| 4.7 Gp39的表达改变了耻垢分枝杆菌细胞壁的结构 | 第87-88页 |
| 4.8 Gp39的表达改变了耻垢分枝杆菌细胞壁的通透性 | 第88-90页 |
| 5 讨论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
| 第6章 氟喹诺酮类药物深层次作用机制研究 | 第96-106页 |
| 1 引言 | 第96-97页 |
| 2 实验材料 | 第97页 |
| 2.1 实验质粒、菌种 | 第97页 |
| 2.2 主要实验材料 | 第97页 |
| 3 实验方法 | 第97-98页 |
| 3.1 菌株的培养 | 第97页 |
| 3.2 MIC测定 | 第97-98页 |
| 3.3 杀菌曲线测定 | 第98页 |
| 4 结果与分析 | 第98-103页 |
| 4.1 氟喹诺酮类药物杀菌活性 | 第98-100页 |
| 4.2 抗氧化剂对氟喹诺酮类药物杀菌作用的影响 | 第100-101页 |
| 4.3 过氧化氢酶KatG和KatE对莫西沙星杀菌作用的影响 | 第101页 |
| 4.4 DNA双链修复系统在莫西沙星杀菌中的作用 | 第101-102页 |
| 4.5 DNA单链修复系统在莫西沙星杀菌中的作用 | 第102-103页 |
| 5 讨论 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 附录 | 第106-108页 |
| 创新点与展望 | 第108-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 在学期间发表的论文 | 第112-113页 |
