| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一部分 拟南芥MORF2蛋白的结构生物学研究 | 第12-62页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 RNA编辑 | 第12-14页 |
| 1.2 与RNA编辑相关蛋白 | 第14-21页 |
| 1.2.1 PPR蛋白家族 | 第14-16页 |
| 1.2.2 MORF蛋白家族 | 第16-20页 |
| 1.2.3 ORRM蛋白 | 第20-21页 |
| 1.2.4 其他RNA编辑因子 | 第21页 |
| 1.3 本论文的选题依据以及创新性 | 第21-23页 |
| 1.3.1 选题依据 | 第21-22页 |
| 1.3.2 选题创新性 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 基因克隆与表达载体的构建 | 第23-31页 |
| 2.1.1 菌种 | 第23页 |
| 2.1.2 表达载体 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂的配置 | 第23-26页 |
| 2.1.3.1 培养基配置 | 第23-24页 |
| 2.1.3.2 抗生素的配置 | 第24页 |
| 2.1.3.3 SDS-PAGE试剂的配置 | 第24-25页 |
| 2.1.3.4 常规试剂配置 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验设备 | 第26-27页 |
| 2.1.5 菌种保存 | 第27页 |
| 2.1.6 感受态细胞的制作 | 第27页 |
| 2.1.7 PCR反应 | 第27-29页 |
| 2.1.8 基因和载体的酶切 | 第29页 |
| 2.1.9 连接反应 | 第29-30页 |
| 2.1.10 转化 | 第30页 |
| 2.1.11 鉴定重组质粒 | 第30-31页 |
| 2.2 蛋白表达和纯化 | 第31-35页 |
| 2.2.1 蛋白表达流程 | 第31-33页 |
| 2.2.2 蛋白纯化 | 第33页 |
| 2.2.3 亲和层析方法 | 第33-34页 |
| 2.2.4 离子交换层析方法 | 第34页 |
| 2.2.5 凝胶滤过层析方法 | 第34-35页 |
| 2.3 蛋白晶体生长 | 第35页 |
| 2.3.1 晶体筛选 | 第35页 |
| 2.3.2 晶体优化 | 第35页 |
| 2.4 数据收集与结构解析 | 第35-37页 |
| 第三章 MORF2蛋白晶体生长和结构解析 | 第37-44页 |
| 3.1 AtMORF2基因与蛋白序列信息 | 第37-38页 |
| 3.2 目的基因的PCR扩增和表达载体构建 | 第38页 |
| 3.3 AtMORF2的表达和纯化 | 第38-40页 |
| 3.4 晶体筛选和优化 | 第40-41页 |
| 3.5 数据收集和结构解析 | 第41-44页 |
| 第四章 MORF2蛋白整体结构 | 第44-52页 |
| 4.1 AtMORF2整体结构 | 第44-46页 |
| 4.2 二聚体的结构基础 | 第46-49页 |
| 4.3 与PPR蛋白的相互作用 | 第49-52页 |
| 第五章 总结与展望 | 第52-54页 |
| 5.1 总结 | 第52页 |
| 5.2 展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 第二部分 拟南芥RPOTm蛋白的克隆表达与纯化 | 第62-90页 |
| 第一章 引言 | 第62-68页 |
| 1.1 RNA聚合酶简介 | 第62页 |
| 1.2 多体RNA聚合酶 | 第62-64页 |
| 1.3 单体RNA聚合酶 | 第64-66页 |
| 1.4 RPOT基因简介 | 第66-68页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第68-69页 |
| 第三章 RPOTm蛋白表达纯化及晶体生长 | 第69-84页 |
| 3.1 拟南芥RPOTm蛋白的序列分析 | 第69-72页 |
| 3.2 拟南芥RPOTm蛋白的构建 | 第72-73页 |
| 3.3 拟南芥RPOTm蛋白的表达和纯化 | 第73-83页 |
| 3.3.1 第一批构建重组蛋白的表达和纯化 | 第73-77页 |
| 3.3.1.1 试表达 | 第73-74页 |
| 3.3.1.2 Ni-NTA亲和层析 | 第74-75页 |
| 3.3.1.3 凝胶过滤层析 | 第75-76页 |
| 3.3.1.4 质谱分析结果 | 第76-77页 |
| 3.3.2 第二批构建重组蛋白的表达和纯化 | 第77-83页 |
| 3.3.2.1 新截短重组蛋白的表达和纯化 | 第77-78页 |
| 3.3.2.2 带有MBP助溶标签重组蛋白的表达和纯化 | 第78-82页 |
| 3.3.2.3 两端带有His6标签重组蛋白的表达和纯化 | 第82-83页 |
| 3.4 拟南芥RPOTm蛋白的晶体生长与筛选 | 第83-84页 |
| 第四章 总结与展望 | 第84-85页 |
| 4.1 总结 | 第84页 |
| 4.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 附录 | 第90-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第99页 |