摘要 | 第6-7页 |
abstract | 第7-8页 |
英文缩略表 | 第12-13页 |
第一章 引言 | 第13-24页 |
1.1 泛素密码 | 第13-17页 |
1.1.1 蛋白质泛素化 | 第13页 |
1.1.2 泛素链类型及功能 | 第13-17页 |
1.2 去泛素化酶 | 第17-20页 |
1.2.1 去泛素化酶种类 | 第17-18页 |
1.2.2 去泛素化酶功能 | 第18-20页 |
1.3 去泛素化酶UCHL | 第20-22页 |
1.3.1 UCHL3 蛋白功能 | 第20-21页 |
1.3.2 UCHL3 蛋白翻译后调控机制 | 第21-22页 |
1.3.3 UCHL3与K27 链接类型泛素链 | 第22页 |
1.4 本课题的研究内容与意义 | 第22-24页 |
第二章 实验材料与方法 | 第24-31页 |
2.1 实验材料 | 第24-27页 |
2.1.1 实验仪器 | 第24-25页 |
2.1.2 实验试剂 | 第25-27页 |
2.2 实验方法 | 第27-31页 |
2.2.1 分子克隆 | 第27-28页 |
2.2.2 蛋白质表达与纯化 | 第28-29页 |
2.2.3 K27 链接类型二泛素的合成 | 第29页 |
2.2.4 蛋白复合物的组装 | 第29页 |
2.2.5 晶体生长与优化 | 第29页 |
2.2.6 晶体数据收集 | 第29页 |
2.2.7 晶体结构解析 | 第29-30页 |
2.2.8 晶体结构分析 | 第30页 |
2.2.9 蛋白相互作用检测 | 第30页 |
2.2.10 Ub-AMC 单泛素切割实验 | 第30页 |
2.2.11 泛素链切割实验 | 第30页 |
2.2.12 序列比对以及系统发育树的构建 | 第30-31页 |
第三章 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物结构解析 | 第31-38页 |
3.1 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物获取 | 第31-33页 |
3.1.1 UCHL3 蛋白获取 | 第31-32页 |
3.1.2 UCHL3 与泛素链相互作用力检测 | 第32-33页 |
3.1.3 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物获取 | 第33页 |
3.2 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物结构解析 | 第33-37页 |
3.2.1 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物晶体获取 | 第33-35页 |
3.2.2 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物数据收集与结构解析 | 第35-37页 |
3.3 总结 | 第37-38页 |
第四章 K27 链接类型二泛素被UCHL3 识别机制分析 | 第38-49页 |
4.1 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物结构分析 | 第38-40页 |
4.1.1 泛素结合位点S | 第38-39页 |
4.1.2 泛素结合位点S | 第39-40页 |
4.2 K27 链接类型二泛素与UCHL3 复合物结构验证 | 第40-46页 |
4.2.1 点突变设计与蛋白获取 | 第40-44页 |
4.2.2 相互作用力验证 | 第44-46页 |
4.3 结构比对与分析 | 第46-48页 |
4.4 总结与讨论 | 第48-49页 |
第五章 磷酸化UCHL3 体外生化研究 | 第49-56页 |
5.1 磷酸化UCHL3 蛋白获取 | 第49-51页 |
5.2 磷酸化UCHL3 体外活性检测 | 第51-53页 |
5.3 UCHL3 序列比对与系统进化树构建 | 第53-54页 |
5.4 总结与讨论 | 第54-56页 |
第六章 全文结论 | 第56-57页 |
主要结论 | 第56页 |
展望 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-63页 |
附录 | 第63-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
作者简历 | 第66页 |