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多重实时PCR技术用于Ph-like急性淋巴细胞白血病融合基因检测的研究

摘要第10-11页
Abstract第11页
第一章 前言第12-27页
    1.1急性淋巴细胞白血病第12-13页
    1.2 Ph-like急性淋巴细胞白血病第13-14页
    1.3 Ph-like ALL分子遗传学异常第14-18页
        1.3.1 JAK激酶通路基因异常第15-16页
        1.3.2 ABL同源激酶基因异常第16-17页
        1.3.3 淋系发育相关转录因子基因异常第17页
        1.3.4 其他激酶基因异常第17-18页
    1.4 Ph-like ALL的治疗第18-20页
    1.5 Ph-like ALL的诊断第20-22页
        1.5.1 基因表达谱分析第20页
        1.5.2 磷酸化流式细胞术第20-21页
        1.5.3 细胞遗传学技术第21页
        1.5.4 基于NGS的方法第21页
        1.5.5 多重RT-PCR第21-22页
    1.6 实时荧光PCR技术第22-26页
        1.6.1 实时PCR通用检测技术第23-24页
        1.6.2 实时PCR的应用第24-26页
    1.7 本论文的研究目的、内容和意义第26-27页
第二章 材料和方法第27-46页
    2.1 临床标本和细胞系第27页
    2.2 总RNA提取和逆转录第27页
    2.3 引物和探针设计第27-35页
        2.3.1 ABL1融合基因第29-30页
        2.3.2 ABL2融合基因第30页
        2.3.3 CSF1R融合基因第30-31页
        2.3.4 PDGFRB融合基因第31-32页
        2.3.5 JAK2融合基因第32-33页
        2.3.6 CRLF2融合基因第33-34页
        2.3.7 TSLP、NTRK3、TYK2和IL2RB融合基因第34页
        2.3.8 IKZF1缺失第34-35页
        2.3.9 GUSB第35页
    2.4 阳性质粒的构建第35-41页
        2.4.1 重叠延伸法构建融合基因质粒的原理第36页
        2.4.2 TA克隆第36-41页
        2.4.3 阳性质粒拷贝数计算第41页
    2.5 媒介探针多重扩增曲线分析考察第41-42页
        2.5.1 媒介子序列确定第41-42页
        2.5.2 多重扩增曲线分析可行性考察第42页
    2.6 单重实时PCR体系建立第42-43页
    2.7 多重实时PCR体系建立第43-44页
        2.7.1 灵敏度实验第44页
        2.7.2 模拟实验第44页
    2.8 多重实时PCR体系的临床验证第44-45页
    2.9 微小残留病定量体系第45-46页
第三章 结果与分析第46-63页
    3.1 多重实时PCR体系的设计第46-47页
    3.2 媒介探针体系建立与考察第47-49页
        3.2.1 媒介子序列的确定第47-48页
        3.2.2 媒介探针多重可行性考察第48-49页
    3.3 单重实时PCR体系的建立第49-50页
    3.4 多重实时PCR体系建立第50-57页
        3.4.1 特异性优化第50-53页
        3.4.2 检测灵敏度优化和考察第53-55页
        3.4.3 模拟实验第55-57页
    3.5 临床标本检测第57-61页
    3.6 微小残留病定量考察第61-63页
第四章 讨论第63-66页
参考文献第66-76页
英文缩写索引第76-78页
致谢第78-79页

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