| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·热应激对奶牛生产的影响 | 第11-12页 |
| ·对奶牛繁殖性能的影响 | 第11页 |
| ·对奶牛免疫性能的影响 | 第11页 |
| ·对产奶量及乳品质的影响 | 第11-12页 |
| ·热应激相关分子机制的研究进展 | 第12-15页 |
| ·热休克蛋白 | 第12-14页 |
| ·热应激诱导的非热休克蛋白 | 第14页 |
| ·奶牛热应激分子标记研究进展 | 第14-15页 |
| ·热应激相关蛋白在细胞凋亡中的作用 | 第15-19页 |
| ·热应激相关蛋白对线粒体凋亡路径的调控 | 第15-18页 |
| ·热应激相关蛋白对膜受体凋亡路径的调控 | 第18-19页 |
| ·研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-28页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·试验材料及采样方法 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·全血RNA提取及反转录 | 第21-24页 |
| ·RNA提取所用试剂 | 第21-22页 |
| ·奶牛外周血总RNA提取和检测 | 第22页 |
| ·总RNA的纯化 | 第22-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| ·cDNA第一链检测 | 第23-24页 |
| ·DNA克隆及测序 | 第24-28页 |
| ·菌株和载体 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第24-25页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒 | 第25-26页 |
| ·目的片段回收及连接转化 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的快速筛选 | 第27页 |
| ·序列测定 | 第27-28页 |
| 第三章 牛全基因组表达谱芯片检测与数据分析 | 第28-39页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·试验动物与采样方法 | 第28页 |
| ·样品处理 | 第28页 |
| ·总RNA的提取与纯化 | 第28-29页 |
| ·Poly(A)+mRNA的提取 | 第29页 |
| ·制备Poly-A RNA Control | 第29页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第29页 |
| ·第二链cDNA合成 | 第29-30页 |
| ·双链DNA纯化 | 第30页 |
| ·生物素标记的cRNA合成 | 第30页 |
| ·芯片杂交 | 第30-31页 |
| ·芯片的洗脱、染色和扫描 | 第31页 |
| ·数据预处理 | 第31页 |
| ·差异基因筛选 | 第31-32页 |
| ·差异基因生物信息学分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·散点图 | 第32-33页 |
| ·基因的杂交结果 | 第33-34页 |
| ·差异表达基因的聚类分析 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-39页 |
| ·基因芯片的选择 | 第35-36页 |
| ·试验设计 | 第36页 |
| ·试验数据分析 | 第36-37页 |
| ·主要差异表达基因的功能 | 第37-39页 |
| 第四章 奶牛CCL3的基因克隆与序列分析 | 第39-59页 |
| ·材料与方法 | 第39-43页 |
| ·试验材料与采样方法 | 第39页 |
| ·奶牛外周血总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·RNA的反转录 | 第40页 |
| ·用于奶牛CCL3基因克隆的引物设计 | 第40-41页 |
| ·CCL3基因cDNA末端的快速扩增 | 第41-42页 |
| ·目的片段的纯化、克隆和鉴定 | 第42页 |
| ·CCL3全长序列拼接和Spidey分析 | 第42页 |
| ·荷斯坦奶牛、荷斯坦杂交牛CCL3基因与标准序列的多重比对 | 第42页 |
| ·奶牛CCL3蛋白的多重比对功能的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-55页 |
| ·CCL3 mRNA序列克隆 | 第43-44页 |
| ·CCL3序列拼接及ORF分析 | 第44-45页 |
| ·奶牛CCL3基因的Spidey分析 | 第45页 |
| ·荷斯坦奶牛、荷斯坦杂交牛CCL3基因与标准序列的多重比对结果 | 第45-47页 |
| ·奶牛CCL3蛋白序列与初级结构分析 | 第47-50页 |
| ·奶牛CCL3蛋白功能分析 | 第50-55页 |
| ·讨论 | 第55-59页 |
| ·CCL3的基因克隆与分析 | 第55-56页 |
| ·奶牛CCL3蛋白分析讨论 | 第56-58页 |
| ·CCL3的免疫调控 | 第58-59页 |
| 第五章 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 A 基因芯片差异表达基因功能聚类 | 第66-73页 |
| 附录 B 奶牛CCL3蛋白序列与chemokine CC的比对 | 第73-75页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
