| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-24页 |
| 1 鱼类弹状病毒研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1 鱼类弹状病毒分类地位 | 第12-14页 |
| 1.2 鱼类弹状病毒的发现及流行情况 | 第14-15页 |
| 1.3 鱼类弹状病毒基因组 | 第15-16页 |
| 1.4 鱼类弹状病毒蛋白研究进展 | 第16-19页 |
| 1.4.1 核蛋白(N) | 第16页 |
| 1.4.2 磷酸化蛋白(P) | 第16-17页 |
| 1.4.3 基质蛋白(M) | 第17页 |
| 1.4.4 糖蛋白(G) | 第17-18页 |
| 1.4.5 RNA依赖的RNA聚合酶蛋白(L) | 第18-19页 |
| 1.4.6 NV蛋白 | 第19页 |
| 2 鱼类弹状病毒相关疫苗研究进展 | 第19-23页 |
| 2.1 疫苗种类 | 第19-21页 |
| 2.2 弹状病毒疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第一章 弱毒疫苗候选株的筛选 | 第24-32页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1 细胞、病毒株 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 仪器和设备 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.1 细胞培养、病毒接种和收毒 | 第25页 |
| 2.2 病毒滴度测定 | 第25页 |
| 2.3 组织总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.4 反转录 | 第26页 |
| 2.5 荧光定量PCR(qPCR) | 第26页 |
| 2.6 鱼体攻毒实验 | 第26-27页 |
| 2.7 弱毒株的免疫保护效力评价 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-30页 |
| 3.1 病毒滴度测定 | 第27页 |
| 3.2 弱毒株的筛选 | 第27-30页 |
| 3.2.1 不同毒株对鳜鱼的致病力分析 | 第27-28页 |
| 3.2.2 不同毒株在感染组织中病毒载量比较分析 | 第28-30页 |
| 3.3 弱毒株MSRV-SS对鳜鱼的免疫保护力 | 第30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 弱毒疫苗株的纯化及克隆株MSRV-SS-7的生物学特性研究 | 第32-52页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 细胞、病毒株 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 仪器和设备 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-40页 |
| 2.1 细胞培养、病毒接种和收毒 | 第33页 |
| 2.2 RNA提取 | 第33页 |
| 2.3 反转录 | 第33-34页 |
| 2.4 荧光定量PCR(qPCR) | 第34页 |
| 2.5 噬斑试验 | 第34页 |
| 2.6 克隆株滴度测定 | 第34-35页 |
| 2.7 G蛋白基因克隆、测序及进化分析 | 第35页 |
| 2.8 细胞病变效应(CPE)及电镜观察 | 第35页 |
| 2.9 生长动力学曲线测定 | 第35-36页 |
| 2.10 全基因组序列测定与分析 | 第36-40页 |
| 2.10.1 引物设计和克隆策略 | 第36-37页 |
| 2.10.2 基因组分段扩增与测序 | 第37-38页 |
| 2.10.3 克隆株cDNA末端快速扩增(RACE) | 第38-39页 |
| 2.10.3.1 5’RACE-ReadycDNA合成 | 第38页 |
| 2.10.3.2 cDNA末端快速扩增 | 第38-39页 |
| 2.10.4 母源株cDNA末端扩增 | 第39页 |
| 2.10.5 TA克隆与测序 | 第39页 |
| 2.10.6 序列分析 | 第39-40页 |
| 2.11 克隆株MSRV-SS-7的免疫保护效力评价 | 第40页 |
| 2.11.1 MSRV-SS-7对鳜鱼的免疫保护效力评价 | 第40页 |
| 2.11.2 MSRV-SS-7对加州鲈鱼的免疫保护效力评价 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-49页 |
| 3.1 弱毒株MSRV-SS的噬斑纯化 | 第40-41页 |
| 3.2 不同克隆株滴度的比较 | 第41页 |
| 3.3 不同克隆株及母源株MSRV-SS的G蛋白基因序列比较分析 | 第41-42页 |
| 3.4 克隆株MSRV-SS-7的CPE特性及电镜观察 | 第42-43页 |
| 3.5 克隆株MSRV-SS-7及母源株MSRV-SS体外生长特性比较 | 第43-44页 |
| 3.6 克隆株MSRV-SS-7和母源株MSRV-SS的全基因组序列及分析 | 第44-48页 |
| 3.6.1 除末端外的基因组序列 | 第44-45页 |
| 3.6.2 基因组精确末端序列 | 第45-46页 |
| 3.6.3 全基因组序列分析 | 第46-48页 |
| 3.7 克隆株MSRV-SS-7对鳜鱼和加州鲈鱼的免疫保护效力 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 弱毒疫苗株MSRV-SS-7的安全性及有效性评价 | 第52-66页 |
| 1 实验材料 | 第52-53页 |
| 1.1 细胞、病毒株 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.3 仪器和设备 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-56页 |
| 2.1 细胞培养、病毒接种和收毒 | 第53页 |
| 2.2 组织总RNA提取 | 第53页 |
| 2.3 反转录 | 第53页 |
| 2.4 荧光定量PCR(qPCR) | 第53-54页 |
| 2.5 疫苗株MSRV-SS-7的安全性实验 | 第54-55页 |
| 2.5.1 MSRV-SS-7对不同种类鱼的攻毒实验 | 第54页 |
| 2.5.2 MSRV-SS-7对鳜鱼的超剂量攻毒实验 | 第54页 |
| 2.5.3 MSRV-SS-7的组织分布及消长规律检测 | 第54-55页 |
| 2.5.4 疫苗株MSRV-SS-7的毒力返强试验 | 第55页 |
| 2.6 疫苗株MSRV-SS-7不同免疫方式的免疫效力评价 | 第55-56页 |
| 2.6.1 腹腔注射免疫(Intraperitonealinjectionimmunization,IP) | 第55页 |
| 2.6.2 浸泡免疫(Immersionimmunization,IM) | 第55-56页 |
| 2.7 疫苗株MSRV-SS-7不同剂量注射免疫保护效力评价 | 第56页 |
| 2.8 疫苗株MSRV-SS-7冷冻干燥保存 | 第56页 |
| 2.9 免疫基因表达量检测 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-64页 |
| 3.1 疫苗株MSRV-SS-7的安全性 | 第56-60页 |
| 3.1.1 疫苗株MSRV-SS-7对不同种类鱼及超剂量安全性分析 | 第56-57页 |
| 3.1.2 疫苗株MSRV-SS-7在体内的组织分布及消长规律 | 第57-60页 |
| 3.1.3 疫苗株MSRV-SS-7毒力返强检验 | 第60页 |
| 3.2 疫苗株MSRV-SS-7的有效性 | 第60-62页 |
| 3.2.1 腹腔注射免疫和浸泡免疫的免疫效力 | 第60-61页 |
| 3.2.2 弱毒疫苗株MSRV-SS-7不同剂量注射免疫对鳜鱼的保护效力 | 第61-62页 |
| 3.3 疫苗的保存期确定 | 第62页 |
| 3.4 疫苗株MSRV-SS-7保护鳜鱼的免疫机制初探 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 全文总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 缩略语表 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
