西瓜黄皮突变体果皮色泽相关的SSHcDNA文库的构建及相关基因初步筛选
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 一、文献综述 | 第8-12页 |
| 1.1 西瓜国内外研究现状及分析 | 第8-10页 |
| 1.2 抑制消减杂交(SSH)技术 | 第10-11页 |
| 1.2.1 抑制消减杂交技术的原理 | 第10页 |
| 1.2.2 抑制消减杂交技术的优点和缺点 | 第10-11页 |
| 1.2.3 抑制消减杂交技术在植物学研究中的应用 | 第11页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| 二、材料与方法 | 第12-24页 |
| 2.1 材料 | 第12页 |
| 2.2 总RNA抽提和MRNA分离 | 第12-13页 |
| 2.2.1 总RNA抽提 | 第12-13页 |
| 2.2.2 mRNA分离 | 第13页 |
| 2.3 SSH文库的构建(技术路线) | 第13-22页 |
| 2.3.1 cDNA第一链的合成 | 第14-15页 |
| 2.3.2 cDNA第二链的合成 | 第15页 |
| 2.3.3 RsaI酶切 | 第15-16页 |
| 2.3.4 接头的连接 | 第16-17页 |
| 2.3.5 第一轮杂交 | 第17-18页 |
| 2.3.6 第二轮杂交 | 第18页 |
| 2.3.7 PCR扩增 | 第18-20页 |
| 2.3.8 正向差减cDNA的纯化与克隆 | 第20页 |
| 2.3.9 阳性克隆筛选 | 第20-21页 |
| 2.3.10 阳性克隆质粒提取 | 第21-22页 |
| 2.4 斑点杂交 | 第22-24页 |
| 2.4.1 试剂配制 | 第22页 |
| 2.4.2 RNA提取与mRNA分离(见2.2) | 第22页 |
| 2.4.3 反转录 | 第22-23页 |
| 2.4.4 cDNA纯化 | 第23页 |
| 2.4.5 斑点杂交及免疫检测 | 第23-24页 |
| 三、结果与分析 | 第24-35页 |
| 3.1 RNA与MRNA的质量检测 | 第24-25页 |
| 3.2 酶切效率分析 | 第25-26页 |
| 3.3 差异筛选差减CDNA文库 | 第26页 |
| 3.4 差减效率分析 | 第26页 |
| 3.5 文库插入片段的检测(蓝白斑筛选) | 第26-27页 |
| 3.6 样品检测的MRNA | 第27-28页 |
| 3.7 EST序列初步分析 | 第28页 |
| 3.8 用CDNA芯片鉴定与西瓜果皮色泽相关基因 | 第28-35页 |
| 四、讨论与结论 | 第35-37页 |
| 4.1 SSH在分离植物差异表达基因中的应用 | 第35页 |
| 4.2 SSH-CDNA文库构建的关键因素 | 第35页 |
| 4.3 EST序列初步筛选 | 第35-36页 |
| 4.4 构建西瓜果皮SSH-CDNA文库的必要性 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 附录 | 第44-46页 |
| 英文缩略表 | 第46页 |
