| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第14-16页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病的发生及发展 | 第14页 |
| 1.1.2 小麦赤霉病的症状及危害 | 第14-15页 |
| 1.1.3 小麦赤霉病抗性类型 | 第15页 |
| 1.1.4 小麦赤霉病抗性机制 | 第15-16页 |
| 1.1.5 小麦赤霉病防控措施 | 第16页 |
| 1.2 转基因技术在小麦中的应用 | 第16-19页 |
| 1.2.1 基因枪法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 农杆菌介导法 | 第18页 |
| 1.2.3 花粉管通道法 | 第18页 |
| 1.2.4 其他方法 | 第18-19页 |
| 1.3 小麦遗传转化的受体选择 | 第19页 |
| 1.4 小麦遗传转化的筛选标记基因 | 第19页 |
| 1.5 小麦赤霉病抗性相关基因的研究 | 第19-20页 |
| 1.6 RNA干扰技术和多基因共转化的应用 | 第20-21页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 酶及试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.4 相关试剂及配制 | 第23-24页 |
| 2.1.5 菌株扩大培养所用培养基 | 第24页 |
| 2.1.6 小麦遗传转化所用培养基 | 第24页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.8 PCR试剂及引物 | 第25-26页 |
| 续表 | 第26-27页 |
| 2.2 基因枪轰击法流程 | 第27-33页 |
| 2.2.1 最小表达框的制备 | 第27-29页 |
| 2.2.1.1 质粒DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.1.2 质粒DNA的酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.1.3 目的DNA片段的酶切回收 | 第28页 |
| 2.2.1.4 目的DNA片段的浓缩 | 第28-29页 |
| 2.2.2 受体转化前的处理 | 第29页 |
| 2.2.2.1 标注开花时期 | 第29页 |
| 2.2.2.2 小麦幼嫩种子的取材及灭菌 | 第29页 |
| 2.2.2.3 剥取幼胚 | 第29页 |
| 2.2.2.4 诱导愈伤 | 第29页 |
| 2.2.2.5 愈伤的高渗处理 | 第29页 |
| 2.2.3 基因枪轰击 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 金粉颗粒的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 金粉包被DNA(以10枪为例) | 第30页 |
| 2.2.3.3 基因枪轰击愈伤 | 第30页 |
| 2.2.4 愈伤组织的后期培养 | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 恢复培养 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 分化筛选及植株再生 | 第31页 |
| 2.2.4.3 壮苗及移栽 | 第31页 |
| 2.2.5 小麦叶片基因组DNA的粗提取 | 第31-32页 |
| 2.2.5.1 CTAB法 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 SDS法 | 第32页 |
| 2.2.6 转基因小麦的PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.2.7 加代种子的萌发种植 | 第32-33页 |
| 2.3 技术路线 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-75页 |
| 3.1 最小表达框DNA片段的制备 | 第34-35页 |
| 3.2 转基因小麦株系的筛选、加代及鉴定 | 第35-68页 |
| 3.2.1 cyp51BAC、gls2-gls6基因转襄麦76的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第37-43页 |
| 3.2.1.1 XⅡ株系T_0代筛选 | 第37-38页 |
| 3.2.1.2 XⅡ株系T_1代PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.1.3 XⅡ株系T_2代PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.1.4 XⅡ株系T_3代PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.1.5 XⅡ株系T_4代PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.1.6 XⅡ株系T_1~T_4代鉴定小结 | 第42-43页 |
| 3.2.2 chs3bAS2-AS3、gls2-gls6基因转襄麦76的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第43-48页 |
| 3.2.2.1 XⅢ株系T_0代筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.2.2 XⅢ株系T_1代PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.2.3 XⅢ株系T_2代PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.2.4 XⅢ株系T_3代PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.2.5 XⅢ株系T_1~T_3代鉴定小结 | 第47-48页 |
| 3.2.3 chs3bAS5、chs3bAS3基因转襄麦76、郑麦9023的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第48-52页 |
| 3.2.3.1 XⅤ-A和Z9Ⅰ-A株系的T0代筛选 | 第48-49页 |
| 3.2.3.2 XⅤ-A和Z9Ⅰ-A株系T1代PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.3.3 XⅤ-A和Z9Ⅰ-A株系T2代PCR鉴定 | 第50页 |
| 3.2.3.4 XⅤ-A株系T3代PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.3.5 XⅤ-A和Z9Ⅰ-A株系T1~T3代鉴定小结 | 第51-52页 |
| 3.2.4 MYO2-AS6基因转襄麦76的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第52-56页 |
| 3.2.4.1 XⅤ-B株系的T_0代筛选 | 第52-53页 |
| 3.2.4.2 XⅤ-B株系的T_1代PCR鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.4.3 XⅤ-B株系的T_2代PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 3.2.4.4 XⅤ-B株系的T_3代PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.4.5 XⅤ-B株系T_1~T_3代鉴定小结 | 第56页 |
| 3.2.5 8mR7基因转襄麦76、郑麦9023的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第56-60页 |
| 3.2.5.1 XⅤ-C和Z9Ⅰ-C株系的T0代筛选 | 第56-57页 |
| 3.2.5.2 XⅤ-C和Z9Ⅰ-C株系T1代PCR鉴定 | 第57-59页 |
| 3.2.5.3 XⅤ-C和Z9Ⅰ-C株系T2代PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 3.2.5.4 XⅤ-C和Z9Ⅰ-C株系T1~T2代鉴定小结 | 第60页 |
| 3.2.68 mR12-47基因转襄麦76的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第60-62页 |
| 3.2.6.1 XⅦ-B株系的T_0代筛选 | 第60-61页 |
| 3.2.6.2 XⅦ-B株系T_1代PCR鉴定 | 第61页 |
| 3.2.6.3 XⅦ-B株系T_2代PCR鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2.6.4 XⅦ-B株系T_1~T_2代鉴定小结 | 第62页 |
| 3.2.7 chs3b-5*2基因转襄麦76的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第62-65页 |
| 3.2.7.1 XⅦ-E株系的T_0代筛选 | 第62-63页 |
| 3.2.7.2 XⅦ-E株系T_1代PCR鉴定 | 第63页 |
| 3.2.7.3 XⅦ-E株系T_2代PCR鉴定 | 第63-65页 |
| 3.2.7.4 XⅦ-E株系T_1~T_2代鉴定小结 | 第65页 |
| 3.2.8 多个串联基因及cyp51基因转扬麦158的转基因植株筛选、加代及鉴定 | 第65-68页 |
| 3.2.8.1 YⅢ株系的T0代筛选 | 第65-66页 |
| 3.2.8.2 YⅢ株系T1代PCR鉴定 | 第66-68页 |
| 3.3 实验室前期获得的部分转基因小麦材料的繁殖及鉴定 | 第68-75页 |
| 3.3.1 JB株系T_4、T_5代种植及PCR鉴定 | 第68-70页 |
| 3.3.2 JV株系T_3、T_4代种植及PCR鉴定 | 第70-71页 |
| 3.3.3 M、J、Z株系的加代种植及PCR鉴定 | 第71-72页 |
| 3.3.4 3B株系T_1代种植及PCR鉴定 | 第72-73页 |
| 3.3.5 8R株系T_1代种植及PCR鉴定 | 第73-74页 |
| 3.3.6 YZ株系T_1代种植及PCR鉴定 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-78页 |
| 4.1 转化材料的再生性及假阳性问题 | 第75-76页 |
| 4.2 外源基因在转基因植株后代中的遗传规律 | 第76页 |
| 4.3 转基因植株的PCR鉴定问题 | 第76-77页 |
| 4.4 襄麦76受体的转基因植株的赤霉病抗性分析 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
