| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 植物维生素E基因工程研究进展 | 第14-23页 |
| 1.1 维生素E在植物中的分布 | 第14-15页 |
| 1.2 维生素E的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.3 植物维生素E基因工程的研究 | 第16-22页 |
| 1.3.1 HPPD | 第18-19页 |
| 1.3.2 HPT | 第19-20页 |
| 1.3.3 HGGT | 第20页 |
| 1.3.4 TC | 第20-21页 |
| 1.3.5 γ-TMT | 第21-22页 |
| 1.4 展望 | 第22-23页 |
| 2 本研究的内容及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 过量共表达维生素E代谢关键基因HPPD和PDH转基因大麦的获得 | 第25-51页 |
| 1 材料与方法 | 第25-41页 |
| 1.1 材料 | 第25页 |
| 1.2 试剂和主要仪器 | 第25页 |
| 1.3 35S：HvHPPD：35S：ScPDH表达载体的构建 | 第25-33页 |
| 1.3.1 35S：HvHPPD：35S：ScPDH表达载体的构建策略 | 第25-26页 |
| 1.3.2 引物设计 | 第26-27页 |
| 1.3.3 PMD19-T simple-HvHPPD构建 | 第27-31页 |
| 1.3.4 35S：HvHPPD表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 1.3.5 35S：ScPDH表达载体的构建 | 第33页 |
| 1.3.6 35S：HvHPPD：35S：ScPDH表达载体的构建 | 第33页 |
| 1.4 农杆菌介导法转化大麦 | 第33-37页 |
| 1.4.1 农杆菌AGLI感受态的制备 | 第33-34页 |
| 1.4.2 农杆菌的电转化 | 第34-35页 |
| 1.4.3 农杆菌转化验证 | 第35页 |
| 1.4.4 AGL1标准接种物的制备 | 第35页 |
| 1.4.5 大麦未成熟种子的收集与灭菌 | 第35-36页 |
| 1.4.6 未成熟胚的分离和胚轴的除去 | 第36页 |
| 1.4.7 农杆菌接种和共培养 | 第36页 |
| 1.4.8 未成熟胚的清洗和抗性愈伤的筛选 | 第36页 |
| 1.4.9 抗性愈伤的分化与再生 | 第36-37页 |
| 1.4.10 试管苗的培养 | 第37页 |
| 1.4.11 转基因苗的驯化和移栽 | 第37页 |
| 1.5 转基因植株分子鉴定 | 第37-41页 |
| 1.5.1 大麦基因组DNA的小量提取 | 第37-38页 |
| 1.5.2 转基因大麦PCR检测 | 第38-39页 |
| 1.5.3 大麦总RNA的提取 | 第39页 |
| 1.5.4 qRT-PCR | 第39-41页 |
| 1.6 维生素E的提取测定 | 第41页 |
| 2 实验结果和分析 | 第41-48页 |
| 2.1 载体构建 | 第41-42页 |
| 2.2 农杆菌介导的HPPD和PDH转基因大麦的获得 | 第42-45页 |
| 2.2.1 大麦的遗传转化 | 第42-43页 |
| 2.2.2 农杆菌的转化方式 | 第43-44页 |
| 2.2.3 共培养后未成熟胚的清洗 | 第44-45页 |
| 2.3 过表达HPPD和PDH转基因大麦T_0代的分子鉴定 | 第45-47页 |
| 2.3.1 PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.2 qRT-PCR | 第46-47页 |
| 2.4 维生素E含量的测定 | 第47-48页 |
| 3 讨论与展望 | 第48-51页 |
| 第三章 过表达HGGT/HPT转基因大麦的分子鉴定和表型分析 | 第51-73页 |
| 1 材料与方法 | 第51-58页 |
| 1.1 材料 | 第51页 |
| 1.2 试剂和主要仪器 | 第51页 |
| 1.3 转基因植株分子鉴定 | 第51-57页 |
| 1.3.1 植物中DNA的小量提取 | 第51页 |
| 1.3.2 植物中总RNA的提取 | 第51页 |
| 1.3.3 植物中DNA的大量提取 | 第51-52页 |
| 1.3.4 PCR鉴定 | 第52页 |
| 1.3.5 GUS染色 | 第52页 |
| 1.3.6 Southern Blot | 第52-56页 |
| 1.3.7 RT-PCR | 第56-57页 |
| 1.4 维生素E的提取测定 | 第57页 |
| 1.5 系统进化树制作方法 | 第57-58页 |
| 2 实验结果与分析 | 第58-71页 |
| 2.1 系统进化分析 | 第58-59页 |
| 2.2 转基因植株分子鉴定 | 第59-66页 |
| 2.2.1 35S：HPT转基因植株分子鉴定 | 第59-61页 |
| 2.2.2 proHor3：HGGT转基因植株分子鉴定 | 第61-66页 |
| 2.3 转基因大麦维生素E含量的测定 | 第66-70页 |
| 2.4 表型观察 | 第70-71页 |
| 3 讨论与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 附录 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 个人简历 | 第80页 |
