| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) | 第12-17页 |
| 1.1.1 PRRS病原学特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 PRRSV分子生物学特征 | 第13-15页 |
| 1.1.3 PRRSV复制的生命周期 | 第15-16页 |
| 1.1.4 PRRSVRNA合成相关的复制转录复合体 | 第16-17页 |
| 1.1.5 PRRSVNsp12研究现状 | 第17页 |
| 1.2 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp12功能的探索研究 | 第18-43页 |
| 2.1 材料和方法 | 第18-29页 |
| 2.1.1 菌株、细胞、质粒和载体 | 第18页 |
| 2.1.2 实验相关的仪器、耗材与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 MegAlign软件分析不同毒株间Nsp12的序列差异 | 第19页 |
| 2.1.4 点突变PCR构建Nsp12突变体质粒及感染性克隆 | 第19-21页 |
| 2.1.5 PRRSVHuN4-F5及其Nsp12突变体感染性克隆的拯救 | 第21页 |
| 2.1.6 TCID_(50)法进行病毒滴度的测定 | 第21页 |
| 2.1.7 间接免疫荧光鉴定HuN4-Nsp12突变体的拯救情况 | 第21-22页 |
| 2.1.8 WesternBlot鉴定HuN4-Nsp12突变体的拯救情况 | 第22-23页 |
| 2.1.9 WesternBlot对Nsp12真核质粒蛋白表达及二聚化的鉴定 | 第23页 |
| 2.1.10 蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV粒子 | 第23-24页 |
| 2.1.11 复制子系统目的片段的PCR扩增 | 第24-26页 |
| 2.1.12 DNA片段的回收 | 第26页 |
| 2.1.13 载体与目的片段的酶切 | 第26-27页 |
| 2.1.14 载体与目的片段的连接 | 第27页 |
| 2.1.15 连接产物的转化与鉴定 | 第27页 |
| 2.1.16 小提质粒用于酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 2.1.17 质粒的大量提取 | 第28页 |
| 2.1.18 激光共聚焦检测Nsp12及其半胱氨酸突变体的定位 | 第28-29页 |
| 2.1.19 转染及荧光素酶活性检测 | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-39页 |
| 2.2.1 不同毒株的Nsp12序列保守性分析 | 第29-30页 |
| 2.2.2 感染性克隆基础上缺失Nsp12病毒的拯救 | 第30-31页 |
| 2.2.3 转染质粒及接种病毒细胞中Nsp12二聚化分析 | 第31-32页 |
| 2.2.4 PRRSVNsp12中二硫键形成原因的分析 | 第32-33页 |
| 2.2.5 Nsp12不同于N蛋白二聚体的形成不存在于成熟病毒粒子 | 第33页 |
| 2.2.6 Nsp12表达质粒中半胱氨酸与二硫键形成的关系 | 第33-34页 |
| 2.2.7 PRRSVNsp12半胱氨酸突变质粒在细胞中定位 | 第34-35页 |
| 2.2.8 Nsp12三位半胱氨酸同时突变影响PRRSV拯救 | 第35-36页 |
| 2.2.9 Nsp12第35、79位半胱氨酸同时突变影响PRRSV拯救 | 第36-37页 |
| 2.2.10 PRRSV复制子的构建及功能评价 | 第37-38页 |
| 2.2.11 通过复制子系统初步证实Nsp12参与病毒RNA合成 | 第38-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-43页 |
| 第三章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
