| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 水稻在我国粮食作物中的地位 | 第14页 |
| 1.2 二化螟的发生与危害 | 第14页 |
| 1.3 转基因抗虫水稻的研发 | 第14-15页 |
| 1.4 Bt毒素作用机理 | 第15-17页 |
| 1.4.1 成孔模型 | 第15页 |
| 1.4.2 信号转导模型 | 第15-16页 |
| 1.4.3 成孔模型和信号转导共同作用模型 | 第16-17页 |
| 1.5 靶标害虫对Bt的抗性 | 第17-22页 |
| 1.5.1 中肠蛋白酶活性的改变 | 第18页 |
| 1.5.2 糖脂和酯酶的作用 | 第18页 |
| 1.5.3 免疫应答的增强 | 第18页 |
| 1.5.4 毒素受体的突变 | 第18-22页 |
| 1.5.4.1 氨肽酶-N(APN)的变异及其与昆虫Bt抗性的关系 | 第18-21页 |
| 1.5.4.2 氨肽酶-N(AminopeptidaseN,APN)的突变 | 第21页 |
| 1.5.4.3 钙粘蛋白(Cadherin,CAD)的变异及其与昆虫Bt抗性的关系 | 第21页 |
| 1.5.4.4 碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,ALP)的变异及其与昆虫Bt抗性的关系 | 第21页 |
| 1.5.4.5 ABC转运蛋白的变异及其与昆虫Bt抗性的关系 | 第21-22页 |
| 1.6 靶标害虫的抗性治理策略 | 第22-24页 |
| 1.6.1 庇护所(Refuge)策略 | 第22-23页 |
| 1.6.2 多基因聚合(PyramidingorCrygenestacking)策略 | 第23页 |
| 1.6.3 改造Bt毒素 | 第23页 |
| 1.6.4 新型Bt毒素的挖掘 | 第23-24页 |
| 1.7 Cry毒素与二化螟中肠受体蛋白互作的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.8 本研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 二化螟中肠氨肽酶-N(APN1)基因的原核表达与纯化 | 第26-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-35页 |
| 2.1.1 供试虫源 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.1.4 cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
| 2.1.5 引物合成与目的片段的扩增 | 第29-30页 |
| 2.1.6 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及回收 | 第30-31页 |
| 2.1.7 表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.1.8 表达载体转化克隆菌株阳性克隆的鉴定 | 第32页 |
| 2.1.9 测序正确的阳性克隆质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.1.10 表达载体转化表达菌株及鉴定 | 第33页 |
| 2.1.11 诱导表达目的蛋白 | 第33-34页 |
| 2.1.12 目的蛋白SDS-PAGE电泳检测 | 第34页 |
| 2.1.13 目的蛋白质谱鉴定 | 第34-35页 |
| 2.1.14 目的蛋白的过量诱导表达 | 第35页 |
| 2.1.15 目的蛋白的纯化 | 第35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-40页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第35-36页 |
| 2.2.2 目的蛋白片段的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.2.3 目的蛋白片段的质谱鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.4 目的蛋白片段的纯化 | 第39-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 二化螟中肠氨肽酶N(APN1)多肽片段与不同Bt毒素的结合特性分析 | 第41-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第41-44页 |
| 3.1.1 仪器与试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.2 CsAPN1多肽片段的生物素化 | 第42页 |
| 3.1.3 生物素化CsAPN1多肽片段的透析 | 第42-43页 |
| 3.1.4 Bt毒素与CsAPN1多肽片段的ELISA饱和结合动力学 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.2.1 Bt毒素与CsAPN1多肽片段的ELISA饱和结合动力学分析 | 第44-48页 |
| 3.2.1.1 Cry1Ab与CsAPN1多肽片段的ELISA饱和结合动力学分析 | 第44页 |
| 3.2.1.2 Cry1C与CsAPN1多肽片段的ELISA饱和结合动力学分析 | 第44页 |
| 3.2.1.3 Cry2Aa与CsAPN1多肽片段的ELISA饱和结合动力学分析 | 第44-48页 |
| 3.3 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 全文结论 | 第49-51页 |
| 4.1 全文结论 | 第49-50页 |
| 4.2 本文创新点 | 第50页 |
| 4.3 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
