| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 病原学 | 第11-13页 |
| 1.1.1 BRSV形态与理化特征 | 第11页 |
| 1.1.2 BRSV基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 基因组编码的蛋白功能 | 第12-13页 |
| 1.2 BRSV致病机理 | 第13页 |
| 1.3 BRSV流行病学 | 第13-14页 |
| 1.4 BRSV临床症状 | 第14-15页 |
| 1.4.1 温和型 | 第14-15页 |
| 1.4.2 急性型 | 第15页 |
| 1.5 BRSV病理变化 | 第15页 |
| 1.6 BRSV诊断方法 | 第15-17页 |
| 1.6.1 病毒分离鉴定 | 第15-16页 |
| 1.6.2 血清学诊断方法 | 第16页 |
| 1.6.3 分子生物学诊断 | 第16-17页 |
| 1.7 牛呼吸道合胞体病毒病的防控 | 第17-18页 |
| 1.7.1 加强饲养管理和消毒工作 | 第17页 |
| 1.7.2 免疫 | 第17-18页 |
| 1.7.3 治疗措施 | 第18页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料 | 第19-20页 |
| 2.1 病毒、病料与载体 | 第19页 |
| 2.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.4 主要液体的配置 | 第20页 |
| 3 方法 | 第20-29页 |
| 3.1 引物设计 | 第20页 |
| 3.2 病毒RNA的提取 | 第20-21页 |
| 3.3 cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 3.4 牛呼吸道和胞体病毒TaqMan荧光定量RT-PCR标准品的制备 | 第22-25页 |
| 3.4.1 常规PCR方法的应体系和扩增参数 | 第22页 |
| 3.4.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| 3.4.3 凝胶回收PCR产物 | 第22-23页 |
| 3.4.4 pGEM-T与BRSV目的基因片段的链接转化 | 第23页 |
| 3.4.5 克隆质粒的转化 | 第23-24页 |
| 3.4.6 菌落的扩增培养 | 第24页 |
| 3.4.7 BRSV重组质粒DNA的提取 | 第24页 |
| 3.4.8 重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| 3.4.9 重组质粒DNA浓度的测定和拷贝数计算 | 第25页 |
| 3.5 牛呼吸道和胞体病毒病荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第25-27页 |
| 3.5.1 荧光定量PCR反应体系及参数优化 | 第25-26页 |
| 3.5.2 引物浓度优化 | 第26页 |
| 3.5.3 探针浓度优化 | 第26页 |
| 3.5.4 荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第26页 |
| 3.5.5 荧光定量RT-PCR的敏感性试验 | 第26-27页 |
| 3.5.6 荧光定量RT-PCR的特异性试验 | 第27页 |
| 3.6 定量RT-PCR方法的应用 | 第27页 |
| 3.7 临床阳性样品的鉴定 | 第27-29页 |
| 3.7.1 定量RT-PCR产物的电泳 | 第27页 |
| 3.7.2 临床阳性样品的常规RT-PCR检测 | 第27-28页 |
| 3.7.3 阳性质粒的测序鉴定 | 第28-29页 |
| 4 结果 | 第29-40页 |
| 4.1 常规RT-PCR扩增结果 | 第29页 |
| 4.2 常规PCR产物的重组质粒鉴定 | 第29-31页 |
| 4.3 质粒拷贝数计算结果 | 第31页 |
| 4.4 荧光定量RT-PCR结果 | 第31-36页 |
| 4.4.1 重组质粒荧光定量RT-PCR结果 | 第31页 |
| 4.4.2 引物浓度优化结果 | 第31-32页 |
| 4.4.3 探针浓度优化结果 | 第32-33页 |
| 4.4.4 荧光定量RT-PCR标准曲线绘制结果 | 第33-34页 |
| 4.4.5 荧光定量RT-PCR敏感性试验结果 | 第34-35页 |
| 4.4.6 荧光定量RT-PCR特异性试验结果 | 第35页 |
| 4.4.7 荧光定量RT-PCR重复性试验结果 | 第35-36页 |
| 4.5 临床样品检测结果 | 第36-37页 |
| 4.6 临床样品的鉴定结果 | 第37-40页 |
| 4.6.1 临床样品电泳结果 | 第37页 |
| 4.6.2 临床阳性样品的常规PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| 4.6.3 临床阳性样品的重组质粒的鉴定结果 | 第38页 |
| 4.6.4 重组质粒测序结果 | 第38-40页 |
| 5 讨论 | 第40-42页 |
| 6 结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
